發(fā)布時間：2020-03-23 10:54

【摘要】：第一部分Th17和Tc17細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子白介素17在哮喘小鼠動物模型中的表達(dá)研究 【目的】探討輔助性T細(xì)胞17(Th17)和CD8+IL-17+細(xì)胞(Tc17)在支氣管哮喘小鼠中的比例變化及其意義。 【方法】24只BABL/c小鼠隨機分成兩組：哮喘組和正常對照組,每組12只,用卵蛋白(OVA)致敏和激發(fā)的方法建立小鼠哮喘模型。然后用流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟單個核細(xì)胞中Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞所占的百分比；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞因子IL-17的水平；雙標(biāo)免疫熒光檢測肺組織中Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞的表達(dá)。 【結(jié)果】哮喘組肺組織炎癥改變明顯；哮喘組脾臟細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例顯著高于對照組(P0.0001),Tc17細(xì)胞比例與顯著高于對照組(P0.001)；哮喘組BALF中,IL-17水平顯著高于正常對照組(P0.001)；哮喘組BAL中細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目明顯高于對照組(P0.01)；肺組織免疫熒光結(jié)果示Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞在哮喘小鼠的肺部有表達(dá),主要分布在支氣管周圍和血管周圍,并且數(shù)量明顯高于對照組(P0.01)。 【結(jié)論】哮喘小鼠的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞數(shù)量增多,并且分泌的細(xì)胞因子IL-17水平升高,而且哮喘小鼠肺部有較多的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞浸潤,提示Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞可能參與了哮喘的發(fā)病機制。 第二部分Toll樣受體2信號對小鼠淋巴瘤EL4細(xì)胞系表達(dá)白細(xì)胞介素(IL)-17影響的研究 【目的】探討TLR2信號通路對小鼠淋巴瘤細(xì)胞系EL4細(xì)胞表達(dá)分泌IL-17A的影響。 【方法】用ELISA法檢測各組細(xì)胞上清液中IL-17A表達(dá)水平,實時熒光定量RT-PCR法檢測各組細(xì)胞中RORyt和IL-17A的：mRNA的表達(dá)水平變化。 【結(jié)果】TLR2配體可以顯著增加細(xì)胞IL-17A和RORyt和IL-17A的mRNA的表達(dá),而TLR2抗體可以將這種促進作用抵消一部分,TLR2配體刺激后細(xì)胞上清中IL-17A蛋白水平也明顯升高。 【結(jié)論】Toll樣受體2信號對小鼠淋巴瘤EL4細(xì)胞系表達(dá)IL-17是起促進作用的,這種作用可能是通過促進轉(zhuǎn)錄因子RORyt的表達(dá)來實現(xiàn)的。 第三部分Toll樣受體2信號激活對Th17細(xì)胞分化和功能的影響研究 【目的】探討Toll樣受體2信號在調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的分化和功能方面的作用,并且初步探討參與調(diào)控的信號通路機制。 【方法】制作小鼠哮喘模型,免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞經(jīng)體外誘導(dǎo)分化成Th17細(xì)胞,細(xì)胞分為四組：(1)空白對照組,(2)用TLR2的配體(LTA)激活TLR2信號組,(3)TLR2的抗體阻斷TLR2信號組,(4)RORc基因的干擾慢病毒組。然后MTT法檢測各組的細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞儀檢測各組胞內(nèi)因子IL-17A的水平,ELISA檢測各組的細(xì)胞上清液中的IL-17A蛋白水平,Real-time RT-PCR檢測各組的Th17相關(guān)細(xì)胞因子(IL-17A、IL-17F和IL-22)的mRNA水平,并檢測轉(zhuǎn)錄因子RORyt的mRNA水平的變化。 【結(jié)果】(1)MTT檢測結(jié)果示,LTA、LTA+TLR2抗體和LTA+慢病毒都能增加Th17細(xì)胞的增殖,與空白對照組比較,P值的大小分別為P0.05,P0.001和P0.01。(2)實時熒光定量PCR結(jié)果表明慢病毒感染細(xì)胞后可使RORc的mRNA水平下降86%,各組的Th17相關(guān)基因(?)nRNA水平檢測,LTA組引起IL-17A、IL-17F和IL-22的mRNA水平明顯升高(P0.05),LTA+TLR2抗體組和LTA+慢病毒組上述升高效應(yīng)又被逆轉(zhuǎn)(P0.05)。(3)蛋白水平檢測胞內(nèi)因子染色流式分析LTA可以明顯刺激增加IL-17A+細(xì)胞的百分比,IL-17A+CD8-%由11.7%增加到22.5%(P0.05)。ELISA檢測細(xì)胞上清中的IL-17A結(jié)果為LTA組引起IL-17A蛋白水平增高(P0.05),而LTA+TLR2抗體組和LTA+慢病毒組蛋白水平又下降(相比較與LTA組,P0.05)。(4)TLR2信號對轉(zhuǎn)錄因子RORyt mRNA水平的影響：LTA組的RORyt mRNA水平明顯增高(P0.001)。 【結(jié)論】TLR2信號能促進Th17細(xì)胞的增殖,能增強Th17細(xì)胞的功能,并且是通過增加特異性的轉(zhuǎn)錄因子RORyt的表達(dá)來實現(xiàn)的。 第四部分支氣管哮喘患者的血漿IL-21和總IgE水平及其相關(guān)性研究 【目的】探討白介素-21(IL-21)和總IgE在支氣管哮喘發(fā)病時的血清水平及其兩者相關(guān)性。 【方法】隨機收集哮喘急性發(fā)作期患者38例(急性發(fā)作組),哮喘緩解期患者23例(緩解組)和健康者19例(對照組)血清,用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清IL-21和總IgE水平 【結(jié)果】哮喘急性發(fā)作期患者血清IL-21水平明顯高于正常對照組(P0.05),急性發(fā)作期IL-21明顯高于緩解期組(P0.05),而緩解期和正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。血清總IgE水平哮喘急性發(fā)作期和緩解期均明顯高于正常對照組(P0.05)。哮喘急性發(fā)作期血清IL-21水平和總IgE水平有顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.32,P0.05)�！窘Y(jié)論】IL-21可能通過調(diào)節(jié)IgE的分泌,在支氣管哮喘的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組;支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2003年03期

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本文編號：2596624