【摘要】： 前言:氣道慢性炎癥和氣道重塑是支氣管哮喘的重要特征,氣道平滑肌細胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)及細胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)作為氣道壁維持氣道結(jié)構(gòu)和功能的重要組成部分,二者在哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要作用。有研究證實在哮喘病理發(fā)展進程中不僅有ASMCs數(shù)量的增加和功能的改變,而且有ECM量和組成的改變;增加的ECM沉積在哮喘整個氣道壁,不僅參與氣道慢性炎癥和氣道重塑,也可能對ASMCs的各種生物學行為產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。ECM能調(diào)控ASMCs的生存,增殖和遷移等生物學行為,但ECM對哮喘ASMCs功能調(diào)控的細胞分子機制尚不清楚。 絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase ,MAPK)、蛋白激酶C(Protein kinase C ,PKC)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-Kinase ,PI3K)信號通路是調(diào)控哮喘ASMCs增殖的的主要信號途徑,但是否參與ECM對哮喘ASMCs的功能調(diào)控,目前尚不清楚。本實驗將哮喘及對照組大鼠ASMCs種植于涂覆有ECM(纖維連接蛋白、Ⅰ型膠原及層粘蛋白)的培養(yǎng)瓶中,檢測各組ASMCs中PI3K、PKC以及MAPK家族中的ERK1/2 mRNA及蛋白的表達情況,了解在哮喘模型大鼠中ECM對MAPK、PI3K、PKC信號分子的影響;以進一步探索ECM是否通過MAPK、PI3K、PKC信號途徑對哮喘ASMCs進行功能調(diào)控。 目的:觀察ECM對哮喘模型大鼠ASMCs中信號分子MAPK(ERK1/2)、PI3K、PKC表達的影響。 方法: 24只雄性wistar大鼠隨機分為哮喘組(12只)和對照組(12只) ,建立哮喘模型;培養(yǎng)哮喘及對照組大鼠ASMCs;然后將哮喘組及對照組ASMCs分別種植在已鋪ECM(分別為纖維連接蛋白、Ⅰ型膠原及層粘蛋白)的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng);利用實時定量PCR法檢測各組ASMCs中ERK1/2、PI3Kp85、PKC-amRNA的表達;Western blot檢測各組ASMCs中ERK1/2、PI3Kp85、PKC-a蛋白的表達。 結(jié)果: ERK1/2、PI3Kp85、PKC-amRNA及蛋白的表達哮喘組均明顯高于對照組(均p0.01)。哮喘纖維連接蛋白組、層粘蛋白組、Ⅰ型膠原組的ERK1/2 mRNA相對表達分別是7.262±0.614、3.278±0.037、4.122±0.125,均明顯高于哮喘空白組(1.525±0.054)(均p0.01);哮喘纖維連接蛋白組、層粘蛋白組、Ⅰ型膠原組PI3Kp85mRNA的相對表達分別是7.626±0.613、9.729±O.682、16.219±0.879,明顯高于哮喘空白組(5.931±0.749)(均p0.01);哮喘纖維連接蛋白組、層粘蛋白組、Ⅰ型膠原組PKC-amRNA相對表達分別是7.626±0.615、9.927±0.122、8.951±0.237,亦明顯高于哮喘空白組(3.478±0.747)(均p0.01)。對照組ASMCs各組用細胞外基質(zhì)處理組與未用細胞外基質(zhì)處理組(空白組)對比基因表達變化不明顯(P0.05)。各組ASMCs中ERK1/2、PKC-α、PI3Kp85的蛋白表達情況與其mRNA表達趨勢是一致的,即ERK1/2、PKC-α、PI3Kp85蛋白的表達哮喘纖維粘連蛋白組、層粘蛋白組、Ⅰ型膠原組均高于哮喘空白組(均p0.01)。 結(jié)論: ECM(包括纖維連接蛋白、層粘蛋白及Ⅰ型膠原)使哮喘大鼠ASMCs中ERK1/2、PKC-α、PI3Kp85mRNA及蛋白表達上調(diào); ECM可能通過MAPK、PKC、PI3K信號途徑對哮喘ASMCs進行功能調(diào)控。
【圖文】：

圖 1 對照組大鼠的肺組織HE×400 倍圖 3 剛從組織塊爬出的梭形的 ASMCs相差顯微鏡×100圖 2 哮喘模型大鼠的肺組織HE×400圖 4 ASMCsα-actin 染色陽性DAB 染色×400

圖 1 對照組大鼠的肺組織HE×400 倍圖 3 剛從組織塊爬出的梭形的 ASMCs相差顯微鏡×100圖 2 哮喘模型大鼠的肺組織HE×400圖 4 ASMCsα-actin 染色陽性DAB 染色×400
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

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本文編號：2595101