【摘要】：研究目的： 支氣管哮喘是嚴重危害人類健康的常見病和多發(fā)病,其發(fā)病率近年呈上升趨勢。支氣管哮喘以氣道慢性嗜酸性粒細胞炎癥、氣道高反應性和氣道重塑為特點,其中氣道重塑是哮喘發(fā)病機制的一個重要環(huán)節(jié)和哮喘氣道病理改變的重要基礎,也是社會醫(yī)療負擔加重和勞動力喪失的最根本原因。如何在哮喘的研究過程中,針對氣道重塑,發(fā)現(xiàn)其發(fā)生機制,以及早期阻斷甚至逆轉其病理過程,是目前哮喘研究中的熱點與難點。 近年來,研究發(fā)現(xiàn)氣道上皮在環(huán)境損傷和修復異常導致重塑機制中起到一個中心作用,而這個機制與氣道上皮間質(zhì)轉化(epithelial to mesenchymal transit EMT)激活密切相關。氣道上皮間質(zhì)轉化是一個在呼吸系統(tǒng)疾病研究中得到重視的新理論,Chiara Folli認為,上皮與間質(zhì)成分如纖維母細胞的相互作用對正常的氣道修復是非常重要的我們的前期研究發(fā)現(xiàn)：FIZZ1在哮喘動物模型Ⅱ型肺泡上皮細胞內(nèi)表達增強,并且誘導支氣管粘膜下a-SMA過表達；FIZZ1轉染的成纖維細胞中,a-SMA和Ⅰ型膠原mRNA和蛋白質(zhì)表達均顯著增高,提示其在哮喘早期的氣道重塑中起著關鍵作用。 因此,我們試圖證明FIZZ1作為EMT的一個潛在誘導劑,誘導上皮化特征的E鈣粘蛋白表達減少；而間質(zhì)化特征的Ⅰ型膠原和纖維連接蛋白1表達增加,從而誘導早期哮喘的氣道重塑。 研究方法： SPF級雌性BALB/c小鼠20只(8-10周齡,體重為20±2g),隨機分為哮喘模型組(OVA) A,和對照組(生理鹽水)B。卵白蛋白(OVA)致敏與激發(fā)建立小鼠哮喘模型；蘇木素伊紅(HE)染色觀察小鼠氣道及肺組織病理變化；免疫組化法檢測肺組織中FIZZ1的表達；實時定量PCR檢測FIZZ1 mRNA、Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白的表達水平；體外培養(yǎng)小鼠肺上皮細胞,FIZZ1重組蛋白及FIZZ1-shRNA干預,Western blot檢測Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達。 統(tǒng)計學分析：所有實驗結果均以均數(shù)±標準差(x±s)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 1.小鼠哮喘模型成功建立的臨床表現(xiàn) 以小鼠在造模過程中出現(xiàn)明顯的活動頻繁,呼吸急促,腹肌抽搐,大、小便失禁,毛發(fā)豎起,部分小鼠出現(xiàn)反應遲鈍,動作遲緩等為誘導哮喘成功的標志。 2.HE染色觀察小鼠肺組織病理學改變。 高倍顯微鏡下觀察可見,A組支氣管黏膜下水腫,黏液腺增生,黏膜及黏膜下層、平滑肌外均可見大量以嗜酸性粒細胞為主的炎癥細胞浸潤；B組肺泡壁結構完整,氣道上皮無增厚,氣道周圍無明顯的炎癥細胞浸潤。 3.兩組小鼠肺組織中FIZZ1的表達水平 小鼠正常對照組中,可見FIZZ1表達較弱,表達于肺泡上皮細胞、細支氣管上皮細胞、巨噬細胞及血管內(nèi)皮細胞；而OVA哮喘組小鼠,在肺泡上皮及細支氣管上皮上存在大量被染成深褐色的FIZZ1陽性免疫反應,同時氣道壁和肺組織內(nèi)大量炎性細胞浸潤,平滑肌增厚等炎癥表現(xiàn)。與對照組相比哮喘組肺組織FIZZ1表達明顯增強,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。 4.小鼠肺組織中FIZZ1 mRNA、I型膠原、纖維連接蛋白的表達水平 與正常組相比,哮喘組氣道上皮中FIZZ1 mRNA、I型膠原和纖維連接蛋白1表達明顯增高,而E鈣粘蛋白表達明顯降低。 5. Western blot法檢測Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達 體外培養(yǎng)MLE-12細胞系,FIZZ1重組蛋白及FIZZ1-shRNA干預24h,采用Western blot法檢測FIZZ1、I型膠原、纖維連接蛋白1的表達水平顯示：FIZZ1重組蛋白干預后Ⅰ型膠原和纖維連接蛋白1顯著增高,E鈣粘蛋白顯著降低；而FIZZl-shRNA干預后,Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達正常。 結論：1. FIZZ1在哮喘小鼠肺組織內(nèi)特異性高表達。 2. FIZZ1作為EMT的一個潛在誘導劑,誘導E鈣粘蛋白表達減少,而Ⅰ型膠原和纖維 連接蛋白表達增加,從而誘導哮喘早期氣道重塑。 意義：我們通過建立小鼠哮喘模型,進一步明確了FIZZ1通過誘導工型膠原和纖維連接蛋白表達增加,E鈣粘蛋白表達減少,導致哮喘早期氣道重塑。阻斷FIZZ1誘導的氣道上皮-間質(zhì)轉化,能夠早期阻斷氣道重塑改變,這為哮喘重塑的治療提供了新的理論依據(jù)和策略。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R562.25

【引證文獻】

相關期刊論文 前1條

1 劉斐;虞堅爾;;支氣管哮喘發(fā)病機制的研究[J];河南中醫(yī);2013年03期

，

本文編號：2595056