【摘要】：研究目的： 支氣管哮喘是嚴(yán)重危害人類健康的常見病和多發(fā)病,其發(fā)病率近年呈上升趨勢。支氣管哮喘以氣道慢性嗜酸性粒細(xì)胞炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑為特點(diǎn),其中氣道重塑是哮喘發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)和哮喘氣道病理改變的重要基礎(chǔ),也是社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)加重和勞動(dòng)力喪失的最根本原因。如何在哮喘的研究過程中,針對氣道重塑,發(fā)現(xiàn)其發(fā)生機(jī)制,以及早期阻斷甚至逆轉(zhuǎn)其病理過程,是目前哮喘研究中的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。 近年來,研究發(fā)現(xiàn)氣道上皮在環(huán)境損傷和修復(fù)異常導(dǎo)致重塑機(jī)制中起到一個(gè)中心作用,而這個(gè)機(jī)制與氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial to mesenchymal transit EMT)激活密切相關(guān)。氣道上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是一個(gè)在呼吸系統(tǒng)疾病研究中得到重視的新理論,Chiara Folli認(rèn)為,上皮與間質(zhì)成分如纖維母細(xì)胞的相互作用對正常的氣道修復(fù)是非常重要的我們的前期研究發(fā)現(xiàn)：FIZZ1在哮喘動(dòng)物模型Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)增強(qiáng),并且誘導(dǎo)支氣管粘膜下a-SMA過表達(dá)；FIZZ1轉(zhuǎn)染的成纖維細(xì)胞中,a-SMA和Ⅰ型膠原mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)均顯著增高,提示其在哮喘早期的氣道重塑中起著關(guān)鍵作用。 因此,我們試圖證明FIZZ1作為EMT的一個(gè)潛在誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)上皮化特征的E鈣粘蛋白表達(dá)減少；而間質(zhì)化特征的Ⅰ型膠原和纖維連接蛋白1表達(dá)增加,從而誘導(dǎo)早期哮喘的氣道重塑。 研究方法： SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠20只(8-10周齡,體重為20±2g),隨機(jī)分為哮喘模型組(OVA) A,和對照組(生理鹽水)B。卵白蛋白(OVA)致敏與激發(fā)建立小鼠哮喘模型；蘇木素伊紅(HE)染色觀察小鼠氣道及肺組織病理變化；免疫組化法檢測肺組織中FIZZ1的表達(dá)；實(shí)時(shí)定量PCR檢測FIZZ1 mRNA、Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白的表達(dá)水平；體外培養(yǎng)小鼠肺上皮細(xì)胞,FIZZ1重組蛋白及FIZZ1-shRNA干預(yù),Western blot檢測Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達(dá)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.小鼠哮喘模型成功建立的臨床表現(xiàn) 以小鼠在造模過程中出現(xiàn)明顯的活動(dòng)頻繁,呼吸急促,腹肌抽搐,大、小便失禁,毛發(fā)豎起,部分小鼠出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍,動(dòng)作遲緩等為誘導(dǎo)哮喘成功的標(biāo)志。 2.HE染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變。 高倍顯微鏡下觀察可見,A組支氣管黏膜下水腫,黏液腺增生,黏膜及黏膜下層、平滑肌外均可見大量以嗜酸性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤；B組肺泡壁結(jié)構(gòu)完整,氣道上皮無增厚,氣道周圍無明顯的炎癥細(xì)胞浸潤。 3.兩組小鼠肺組織中FIZZ1的表達(dá)水平 小鼠正常對照組中,可見FIZZ1表達(dá)較弱,表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞、細(xì)支氣管上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞；而OVA哮喘組小鼠,在肺泡上皮及細(xì)支氣管上皮上存在大量被染成深褐色的FIZZ1陽性免疫反應(yīng),同時(shí)氣道壁和肺組織內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤,平滑肌增厚等炎癥表現(xiàn)。與對照組相比哮喘組肺組織FIZZ1表達(dá)明顯增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 4.小鼠肺組織中FIZZ1 mRNA、I型膠原、纖維連接蛋白的表達(dá)水平 與正常組相比,哮喘組氣道上皮中FIZZ1 mRNA、I型膠原和纖維連接蛋白1表達(dá)明顯增高,而E鈣粘蛋白表達(dá)明顯降低。 5. Western blot法檢測Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達(dá) 體外培養(yǎng)MLE-12細(xì)胞系,FIZZ1重組蛋白及FIZZ1-shRNA干預(yù)24h,采用Western blot法檢測FIZZ1、I型膠原、纖維連接蛋白1的表達(dá)水平顯示：FIZZ1重組蛋白干預(yù)后Ⅰ型膠原和纖維連接蛋白1顯著增高,E鈣粘蛋白顯著降低；而FIZZl-shRNA干預(yù)后,Ⅰ型膠原、纖維連接蛋白1和E鈣粘蛋白的表達(dá)正常。 結(jié)論：1. FIZZ1在哮喘小鼠肺組織內(nèi)特異性高表達(dá)。 2. FIZZ1作為EMT的一個(gè)潛在誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)E鈣粘蛋白表達(dá)減少,而Ⅰ型膠原和纖維 連接蛋白表達(dá)增加,從而誘導(dǎo)哮喘早期氣道重塑。 意義：我們通過建立小鼠哮喘模型,進(jìn)一步明確了FIZZ1通過誘導(dǎo)工型膠原和纖維連接蛋白表達(dá)增加,E鈣粘蛋白表達(dá)減少,導(dǎo)致哮喘早期氣道重塑。阻斷FIZZ1誘導(dǎo)的氣道上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,能夠早期阻斷氣道重塑改變,這為哮喘重塑的治療提供了新的理論依據(jù)和策略。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R562.25

【引證文獻(xiàn)】

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1 劉斐;虞堅(jiān)爾;;支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制的研究[J];河南中醫(yī);2013年03期

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本文編號(hào)：2595056