【摘要】：目的:研究表明PM2.5因含有大量的致突變和致畸物質(zhì),易導(dǎo)致機體DNA損傷及惡性腫瘤的產(chǎn)生。低氧是很多呼吸系統(tǒng)疾病的表現(xiàn),當(dāng)?shù)脱鹾蚉M2.5并存時可加重肺損傷,其致DNA損傷及應(yīng)答的機制尚未完全闡明�；钚匝�(ROS)的形成與DNA的損傷關(guān)系密不可分,研究證實N-乙酰半胱氨酸(NAC)具有抗氧化和抑制細胞因子的作用,但NAC能否通過抗氧化的作用降低DNA的損傷尚不明確。本研究旨在探討PM2.5聯(lián)合低氧暴露對大鼠肺組織DNA損傷的情況及對DNA損傷應(yīng)答通路ATM-Chk2通路的影響,并探究NAC的保護作用。方法:1.動物分組:健康SPF級SD雄性大鼠,隨機分為凈化組、PM2.5組、低氧組、PM2.5+低氧組、PM2.5+NAC組、PM2.5+低氧+NAC組,每組各6只。凈化組吸入用空氣過濾器過濾的清潔空氣,低氧組于常壓低氧箱內(nèi)(氧濃度為10%±0.5%)飼養(yǎng)1個月,PM2.5組大鼠室外空氣暴露2個月,低氧聯(lián)合PM2.5組于常壓低氧箱內(nèi)飼養(yǎng)1個月后再室外空氣暴露1個月,PM2.5+NAC組室外空氣暴露2個月同時每日N-乙酰半胱氨酸(150mg/kg/d)灌胃,PM2.5+低氧+NAC組于低氧箱中飼養(yǎng)1個月后再室外空氣暴露1個月的同時每日N-乙酰半胱氨酸(150mg/kg/d)灌胃。2.采用HE染色法觀察大鼠肺組織病理學(xué)改變。3.單細胞凝膠電泳實驗,也稱為彗星實驗(Comet Assay),是一種在單個細胞水平檢測DNA損傷的靈敏技術(shù),采用彗星實驗檢測各組大鼠肺組織DNA損傷水平,以觀察PM2.5的遺傳毒性。4.ATM、Chk2測定:提取肺組織,應(yīng)用免疫熒光染色法、Western blot法測定肺組織ATM、Chk2蛋白表達水平,RT-PCR法測定ATM、Chk2m RNA表達水平。結(jié)果:1.大鼠肺組織病理形態(tài)改變:與凈化組相比,PM2.5組、低氧組及PM2.5+低氧組顯微鏡下可見肺泡、肺間質(zhì)炎性病變,及肺泡結(jié)構(gòu)破壞。應(yīng)用NAC干預(yù)后,則肺泡結(jié)構(gòu)及炎性浸潤有所改善。2.彗星實驗結(jié)果:以O(shè)live尾矩即尾部DNA百分含量×(尾光密度中心-頭光密度中心)的平均值代表DNA損傷程度。結(jié)果表明,與凈化組比較,PM2.5組、PM2.5+低氧組大鼠肺組織細胞Olive尾距均明顯增加(P0.05);可觀察到低氧組較凈化組Olive尾距有所增加,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用NAC干預(yù)后,PM2.5+NAC組的Olive尾距較PM2.5組明顯減低(P0.05);PM2.5+低氧+NAC組的Olive尾距較PM2.5+低氧組明顯減低(P0.05)。3.大鼠肺組織ATM、Chk2 m RNA表達量測定:PM2.5組、低氧組及PM2.5+低氧組的大鼠肺組織內(nèi)ATM和Chk2的m RNA表達量較凈化組均明顯上升(P0.05)。應(yīng)用NAC干預(yù)后,PM2.5+NAC組的ATM和Chk2的m RNA表達量較PM2.5組均明顯下降(P0.05);PM2.5+低氧+NAC組的ATM和Chk2的m RNA表達量較PM2.5+低氧組均明顯下降(P0.05)。4.大鼠肺組織ATM、Chk2蛋白表達量測定:4.1免疫熒光結(jié)果:PM2.5組、低氧組及PM2.5+低氧組的大鼠肺組織內(nèi)ATM和Chk2的蛋白相對表達量較凈化組均明顯上升(P0.05)。應(yīng)用NAC干預(yù)后,PM2.5+NAC組的ATM和Chk2蛋白相對表達量較PM2.5組均明顯下降(P0.05);PM2.5+低氧+NAC組的ATM和Chk2蛋白相對表達量較PM2.5+低氧組均明顯下降(P0.05)。4.2 Western blot結(jié)果:PM2.5組、低氧組及PM2.5+低氧組的大鼠肺組織內(nèi)ATM和Chk2的蛋白表達量較凈化組均明顯上升(P0.05)。應(yīng)用NAC干預(yù)后,PM2.5+NAC組的ATM和Chk2的蛋白表達量較PM2.5組均明顯下降(P0.05);PM2.5+低氧+NAC組的ATM和Chk2的蛋白表達量較PM2.5+低氧組均明顯下降(P0.05)。結(jié)論:1.PM2.5、低氧及PM2.5聯(lián)合低氧均可造成大鼠肺組織肺泡、肺間質(zhì)炎性病變,及肺泡結(jié)構(gòu)破壞。2.PM2.5、低氧及PM2.5聯(lián)合低氧均可致大鼠肺組織細胞DNA損傷,并可通過ATM-Chk2通路介導(dǎo)相應(yīng)的損傷應(yīng)答。3.應(yīng)用NAC干預(yù)后,可改善肺泡結(jié)構(gòu)及炎性浸潤等病理病變,降低大鼠肺組織DNA損傷水平,從而抑制ATM-Chk2通路的表達。
【圖文】：

顯微鏡下各組大鼠肺組織病理學(xué)改變（400×）

彗星實驗檢測細胞DNA損傷Fig.2DetectionofDNAdamageincellsbyCometAssayDEF
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R563

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 顏森波;于國偉;諶慧;;PM_(2.5)對DNA的損傷作用概述[J];職業(yè)與健康;2015年06期

2 郭妍宏;朱應(yīng)葆;;DNA損傷檢驗點調(diào)控的分子機制[J];生理科學(xué)進展;2007年03期

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本文編號：2593028