【摘要】：目的觀察肺泡巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-146a后細(xì)胞漿與細(xì)胞核內(nèi)核因子-κB(NF-κB)表達(dá)的變化,探討miR-146a調(diào)控肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的可能機(jī)制。方法將NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞分成兩組:一組為轉(zhuǎn)染組,轉(zhuǎn)染50 nmol/L Pre-miRTMmiR-146a Precursors;另一組為對(duì)照組,轉(zhuǎn)染50 nmol CyTM3-labeled PremiRTMNegative Control。兩組細(xì)胞轉(zhuǎn)染24 h后加入含脂多糖培養(yǎng)基(終濃度1μg/mL),培養(yǎng)6 h后收集細(xì)胞,分別提取細(xì)胞漿蛋白與細(xì)胞核蛋白,采用Western blot方法檢測(cè)NF-κB p65蛋白的表達(dá)。結(jié)果轉(zhuǎn)染組miR-146a表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)(P0.01)。轉(zhuǎn)染組細(xì)胞漿內(nèi)NF-κB p65蛋白表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)(P0.05),而細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65蛋白表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)(P0.05)。結(jié)論肺泡巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-146a可抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位,推測(cè)miR-146a通過此機(jī)制減輕肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
【圖文】：

際?常規(guī)SDS－PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、免疫學(xué)處理及曝光。分別選取β－actin和LaminB1作為內(nèi)參，檢測(cè)細(xì)胞漿、細(xì)胞核內(nèi)NF－κBp65蛋白的表達(dá)。1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。2結(jié)果2．1CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的轉(zhuǎn)染效率25nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNega-tiveControl的轉(zhuǎn)染效率約為70%，50nmol/L的轉(zhuǎn)染效率約為80%，100nmol/L的轉(zhuǎn)染效率約為50%。結(jié)果表明50nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl轉(zhuǎn)染細(xì)胞效率較高。見圖1。圖1不同濃度CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的轉(zhuǎn)染情況(×400)2．2兩組細(xì)胞miＲ－146a表達(dá)比較設(shè)對(duì)照組細(xì)胞miＲ－146a的表達(dá)量為1.00±0.00，則轉(zhuǎn)染組細(xì)胞miＲ－146a的表達(dá)量為24.55±6.14，與對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染組miＲ－146a表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)。2．3兩組細(xì)胞NF－κBp65蛋白含量比較轉(zhuǎn)染組細(xì)胞漿內(nèi)NF－κBp65蛋白表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)(P＜0.05)，而細(xì)胞核內(nèi)NF－κBp65蛋白表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)(P＜0.05)，見圖2、表1。3討論肺泡巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的固有免疫反應(yīng)在AＲDS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用［6］。肺泡巨噬細(xì)胞受到機(jī)械損傷、病原微生物或炎癥因子刺激時(shí)，激活細(xì)胞膜上的Toll樣受體(TLＲ)，然后通過一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活NF－κB向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位，誘導(dǎo)大量炎癥因子和炎癥通路信號(hào)蛋白的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，失控性釋放大量炎癥因子，促進(jìn)炎癥的級(jí)聯(lián)放大，形成肺內(nèi)炎癥“瀑布”反應(yīng)［7－8］�；罨�·2815·廣東醫(yī)學(xué)2014年9月第35卷第18期GuangdongMedicalJournalSep．2014，，Vol．35，No．18

圖2兩組細(xì)胞NF－κBp65蛋白的表達(dá)表1兩組細(xì)胞NF－κBp65蛋白表達(dá)比較xs

本文編號(hào)：2521696