【摘要】：【目的】觀察低氧培養(yǎng)的豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)和生理特性方面的變化；觀察低氧對內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響；研究HIF-1α和TGF-β1的關(guān)系以及它們在調(diào)節(jié)豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用。 【方法】實驗由兩部分組成（1）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前的實驗部分：采用酶消化法提取豬原代肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞,劃痕實驗檢測低氧環(huán)境對內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響，設(shè)置常氧組作為對照；免疫熒光雙標(biāo)記檢測內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原VE-cadherin和間質(zhì)細(xì)胞抗原α-SMA，，觀察常氧組和低氧組VE-cadherin和α-SMA表達(dá)量的變化，計算轉(zhuǎn)化率，進(jìn)行統(tǒng)計分析； Western blot、RT-PCR等實驗檢測常氧組和低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中HIF-1α、VE-cadherin、TGF-β1和α-SMA的蛋白及mRNΑ表達(dá)。（2）細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染部分：轉(zhuǎn)染HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒或者干擾質(zhì)粒，使其過表達(dá)或者沉默，Western blot、RT-PCR檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞中VE-cadherin、TGF-β1和α-SMA的蛋白及mRNA表達(dá)。 【結(jié)果】 1.轉(zhuǎn)染前的實驗： （1）與常氧組比較，低氧組內(nèi)皮細(xì)胞由原來的多角形結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變成長梭形樣結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，單層排列的鵝卵石樣結(jié)構(gòu)消失；此外，低氧下內(nèi)皮細(xì)胞與細(xì)胞間的粘附力減弱，遷移能力增強（P＜0.01）； （2）免疫熒光結(jié)果顯示：低氧組內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化率明顯高于常氧組（P0.01）； （3）Western blot結(jié)果顯示低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中，HIF-1α、TGF-β1、α-SMA的蛋白表達(dá)高于常氧組（P0.05），而VE-cadherin在低氧組的表達(dá)逐漸下降（P0.05）； （4）RT-PCR結(jié)果顯示低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中，HIF-1α、TGF-β1、α-SMA的mRNA水平高于常氧組（P0.05），而VE-cadherin的mRNA水平低于常氧組（P0.05）。 2.轉(zhuǎn)染后的實驗： （1）HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染原代豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞；低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組細(xì)胞中α-SMA的蛋白和mRNA表達(dá)水平高于其他三組（P0.05）；VE-cadherin的蛋白和mRNA表達(dá)水平低于其他三組（P0.05）。 （2）成功轉(zhuǎn)染HIF-1α干擾質(zhì)粒；低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組細(xì)胞中α-SMA的蛋白和mRNA水平低于低氧4天+空白質(zhì)粒組，但仍高于常氧組（P0.05）；VE-cadherin的蛋白和mRNA表達(dá)水平高于低氧4天+空白質(zhì)粒組，但仍低于常氧組（P0.05）。 （3）轉(zhuǎn)染HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒，TGF-β1的蛋白和mRNA水平在低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組高于其他三組（P0.05）；轉(zhuǎn)染HIF-1α干擾質(zhì)粒，TGF-β1的蛋白和mRNA表達(dá)水平低于低氧4天+空白質(zhì)粒組（P0.05），與常氧組比較無差別（P0.05）。 【結(jié)論】 1.低氧誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變； 2.低氧促使原代豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞的粘附力下降，遷移能力增強，可能是其發(fā)生內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制之一； 3.低氧穩(wěn)定核內(nèi)的HIF-1α蛋白，HIF-1α上調(diào)豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá)，而TGF-β1介導(dǎo)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.9

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本文編號：2519960