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HIF-1α調(diào)控TGF-β1介導(dǎo)低氧培養(yǎng)的豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化

發(fā)布時間:2019-07-27 11:13
【摘要】:【目的】觀察低氧培養(yǎng)的豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)和生理特性方面的變化;觀察低氧對內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響;研究HIF-1α和TGF-β1的關(guān)系以及它們在調(diào)節(jié)豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用。 【方法】實驗由兩部分組成(1)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前的實驗部分:采用酶消化法提取豬原代肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞,劃痕實驗檢測低氧環(huán)境對內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響,設(shè)置常氧組作為對照;免疫熒光雙標(biāo)記檢測內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原VE-cadherin和間質(zhì)細(xì)胞抗原α-SMA,,觀察常氧組和低氧組VE-cadherin和α-SMA表達(dá)量的變化,計算轉(zhuǎn)化率,進(jìn)行統(tǒng)計分析; Western blot、RT-PCR等實驗檢測常氧組和低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中HIF-1α、VE-cadherin、TGF-β1和α-SMA的蛋白及mRNΑ表達(dá)。(2)細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染部分:轉(zhuǎn)染HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒或者干擾質(zhì)粒,使其過表達(dá)或者沉默,Western blot、RT-PCR檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞中VE-cadherin、TGF-β1和α-SMA的蛋白及mRNA表達(dá)。 【結(jié)果】 1.轉(zhuǎn)染前的實驗: (1)與常氧組比較,低氧組內(nèi)皮細(xì)胞由原來的多角形結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變成長梭形樣結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變,單層排列的鵝卵石樣結(jié)構(gòu)消失;此外,低氧下內(nèi)皮細(xì)胞與細(xì)胞間的粘附力減弱,遷移能力增強(P<0.01); (2)免疫熒光結(jié)果顯示:低氧組內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化率明顯高于常氧組(P0.01); (3)Western blot結(jié)果顯示低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中,HIF-1α、TGF-β1、α-SMA的蛋白表達(dá)高于常氧組(P0.05),而VE-cadherin在低氧組的表達(dá)逐漸下降(P0.05); (4)RT-PCR結(jié)果顯示低氧組內(nèi)皮細(xì)胞中,HIF-1α、TGF-β1、α-SMA的mRNA水平高于常氧組(P0.05),而VE-cadherin的mRNA水平低于常氧組(P0.05)。 2.轉(zhuǎn)染后的實驗: (1)HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染原代豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞;低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組細(xì)胞中α-SMA的蛋白和mRNA表達(dá)水平高于其他三組(P0.05);VE-cadherin的蛋白和mRNA表達(dá)水平低于其他三組(P0.05)。 (2)成功轉(zhuǎn)染HIF-1α干擾質(zhì)粒;低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組細(xì)胞中α-SMA的蛋白和mRNA水平低于低氧4天+空白質(zhì)粒組,但仍高于常氧組(P0.05);VE-cadherin的蛋白和mRNA表達(dá)水平高于低氧4天+空白質(zhì)粒組,但仍低于常氧組(P0.05)。 (3)轉(zhuǎn)染HIF-1α過表達(dá)質(zhì)粒,TGF-β1的蛋白和mRNA水平在低氧4天+HIF-1α過表達(dá)組高于其他三組(P0.05);轉(zhuǎn)染HIF-1α干擾質(zhì)粒,TGF-β1的蛋白和mRNA表達(dá)水平低于低氧4天+空白質(zhì)粒組(P0.05),與常氧組比較無差別(P0.05)。 【結(jié)論】 1.低氧誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變; 2.低氧促使原代豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞的粘附力下降,遷移能力增強,可能是其發(fā)生內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制之一; 3.低氧穩(wěn)定核內(nèi)的HIF-1α蛋白,HIF-1α上調(diào)豬肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá),而TGF-β1介導(dǎo)內(nèi)皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。
【學(xué)位授予單位】:南華大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號】:R563.9

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