【摘要】：目的：研究博萊霉素是否可誘導(dǎo)胸膜間皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換（EMT），探討胸膜間皮細(xì)胞發(fā)生EMT在特發(fā)性肺纖維化發(fā)生中的作用。 方法：體外培養(yǎng)胸膜間皮細(xì)胞，以博萊霉素處理，觀察胸膜間皮細(xì)胞Ⅰ型膠原表達(dá)的變化；Western blot測定胸膜間皮細(xì)胞發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換時相關(guān)表型蛋白的變化；倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化；細(xì)胞劃痕實驗檢測胸膜間皮細(xì)胞的遷移。最后用博萊霉素多次腹腔注射的方法復(fù)制C57小鼠肺纖維化模型，Masson三聯(lián)染色檢測肺組織膠原含量、免疫熒光檢測胸膜間皮細(xì)胞標(biāo)志物calretinin蛋白表達(dá)，從而在體判斷胸膜間皮細(xì)胞的肺內(nèi)移行情況。 結(jié)果：博萊霉素處理胸膜間皮細(xì)胞后，Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)升高，上皮細(xì)胞表型蛋白CK-8蛋白表達(dá)下降，間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白波形蛋白、α-SMA蛋白表達(dá)升高，而與細(xì)胞完整性相關(guān)的E-鈣粘蛋白表達(dá)不變。細(xì)胞形態(tài)在24h發(fā)生改變，48h、72h更為明顯，由鵝卵石形逐漸拉長向梭形改變。細(xì)胞劃痕實驗提示博萊霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移明顯大于對照組。肺纖維化動物模型中Masson染色結(jié)果顯示，博萊霉素導(dǎo)致肺內(nèi)大量纖維化灶形成，以胸膜下為主，伴明顯的胸膜增厚，膠原表達(dá)含量明顯增加；免疫熒光染色顯示，肺實質(zhì)內(nèi)尤其纖維灶的部位胸膜間皮細(xì)胞標(biāo)志物calretinin蛋白表達(dá)明顯增多，提示胸膜間皮細(xì)胞向肺內(nèi)移行。 結(jié)論：博萊霉素可誘導(dǎo)胸膜間皮細(xì)胞發(fā)生EMT，胸膜間皮細(xì)胞EMT在特發(fā)性肺纖維化發(fā)病機制中可能起重要作用。
[Abstract]:Aim: to investigate whether bleomycin can induce epithelial-mesenchymal transition (EMT),) in pleural mesothelial cells to investigate the role of EMT in the pathogenesis of idiopathic pulmonary fibrosis. Methods: pleural mesothelial cells were cultured in vitro and treated with bleomycin to observe the changes of type I collagen expression in pleural mesothelial cells. The changes of phenotypic proteins associated with epithelial-mesenchymal transition in pleural mesothelial cells were determined by Western blot. Cell morphology was observed under inverted phase contrast microscope and migration of pleural mesothelial cells was detected by cell scratch assay. The pulmonary tissue collagen content was detected by Masson triple staining and the expression of calretinin protein in pleural mesothelial cells was detected by immunofluorescence. Thus the pulmonary migration of pleural mesothelial cells was judged in vivo. Results: after treated with bleomycin, the expression of type I collagen protein increased, the expression of phenotypic protein CK-8 protein decreased, and that of mesenchymal cell marker protein vimentin and 偽 -SMA protein increased. The expression of E-cadherin associated with cell integrity remained unchanged. The change of cell morphology was more obvious at 48h and 72h, from cobblestone to fusiform. Cell scratch test showed that bleomycin induced cell migration was significantly higher than that of control group. The results of Masson staining in pulmonary fibrosis animal model showed that bleomycin caused a large number of pulmonary fibrosis foci, mainly in the subpleural area, accompanied by obvious pleural thickening, collagen expression increased significantly, immunofluorescence staining showed that, The expression of calretinin protein in the pleural mesothelial cells, especially in the fibrous foci, was significantly increased, indicating the migration of pleural mesothelial cells to the lung. Conclusion: bleomycin can induce the development of EMT, pleural mesothelial cells and EMT may play an important role in the pathogenesis of idiopathic pulmonary fibrosis.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2259210