【摘要】：目的:探討蛋白激酶C(PKC)-紅系衍生的核因子相關(guān)因子2(Nrf2)對香煙煙霧提取物(CSE)誘導(dǎo)的大鼠氣道上皮細(xì)胞血紅素加氧酶1(HO-1)表達(dá)的影響。方法:通過CSE刺激雄性SD大鼠氣道上皮細(xì)胞,使用PKC抑制劑RO318220和Nrf2 siRNA,將細(xì)胞分為對照組、CSE 3 h組、RO318220組、Nrf2 siRNA組和RO318220+Nrf2 siRNA組,用Western blotting法分別檢測HO-1、Nrf2和p-PKC蛋白表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察HO-1蛋白表達(dá),逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測HO-1 mRNA表達(dá),免疫熒光法檢測Nrf2蛋白定位,測定HO-1活性。結(jié)果:暴露CSE 3 h后,Nrf2蛋白主要表達(dá)在胞核,胞核蛋白表達(dá)增強(qiáng),p-PKC蛋白、HO-1的mRNA和蛋白高表達(dá),HO-1活性增強(qiáng)。預(yù)先給予RO318220,PKC蛋白、Nrf2胞漿和胞核蛋白、HO-1的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯減弱,HO-1活性顯著降低。預(yù)先用siRNA沉默Nrf2,胞漿和胞核的Nrf2蛋白表達(dá)均減弱,HO-1活性、mRNA和蛋白水平明顯降低。RO318220聯(lián)合Nrf2 siRNA處理后,PKC蛋白、Nrf2胞漿和胞核蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)均明顯降低,HO-1活性明顯降低。結(jié)論:CSE通過PKC激活Nrf2,誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位,從而上調(diào)HO-1的表達(dá)水平。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of protein kinase C (PKC)-erythroid derived nuclear factor-related factor 2 (Nrf2) on the expression of heme oxygenase 1 (HO-1) in rat airway epithelial cells induced by cigarette smoke extract (CSE). Methods: the airway epithelial cells of male SD rats were stimulated by CSE. The cells were divided into two groups: control group (control group) for 3 h with PKC inhibitor RO318220 and Nrf2 siRNA,. The expression of HO-1,Nrf2 and p-PKC protein was detected by Western blotting method. The expression of HO-1 protein was detected by immunocytochemistry, the expression of HO-1 mRNA was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), the localization of Nrf2 protein and the activity of HO-1 were detected by immunofluorescence. Results: after exposure to CSE for 3 h, the expression of nrf2 protein was mainly found in the nucleus, and the expression of nuclear protein enhanced the activity of mRNA and HO-1 of p-PKC protein. The expression of mRNA and protein of RO318220,PKC protein nrf2 in cytoplasm and nuclear protein was significantly decreased. The expression of Nrf2 protein in cytoplasm and nucleus of Nrf2, was inhibited by siRNA in advance. The activity and protein level of Nrf2, HO-1 were significantly decreased after treated with Nrf2 siRNA combined with .RO318220. The expression of mRNA and protein in the cytoplasm and nucleoprotein of nrf2 and nucleoprotein HHO-1 were significantly decreased after treatment with .RO318220, and the activity of HO-1 was significantly decreased. Conclusion Nrf2 nuclear translocation was induced by Nrf2, activated by PKC, and the expression of HO-1 was upregulated.
【作者單位】： 湖南省人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【分類號】：R563.9

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本文編號：2227762