本文選題：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞 + 凋亡　； 參考：《遵義醫(yī)學(xué)院》2013年碩士論文

【摘要】：目的：篩選并驗(yàn)證肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar type Ⅱ epithelial cell, AEC-Ⅱ)凋亡相關(guān)microRNA(miRN A)。 方法：(1)模型建立：分離、純化、鑒定并原代培養(yǎng)AEC-H36h,0.5mmol/L H2O2誘導(dǎo)建立AEC-Ⅱ凋亡模型。(2)凋亡檢測(cè)：分別于建模前(TO)、建模后2.5h(T2.5)、6h(T6)、12h(T12)及24h(T24)收集細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率,透射電子顯微鏡(TEM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài)。(3)基因芯片篩選凋亡相關(guān)miRNA:分別于TO及T24收集細(xì)胞行miRNA芯片檢測(cè),比較兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)miRNA表達(dá)譜的差異,并從差異表達(dá)的miRNA中篩選凋亡相關(guān)miRNA=(4) Real-time PCR驗(yàn)證凋亡相關(guān)miRNA:選取3個(gè)凋亡相關(guān)miRNA行Real-time PCR檢測(cè),以驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性。(5)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)靶基因：綜合運(yùn)用TargetScan、miRecords、TarBase、miRTarBase預(yù)測(cè)經(jīng)驗(yàn)證的miRNA的靶基因,并從預(yù)測(cè)結(jié)果中篩選凋亡相關(guān)靶基因。 結(jié)果：(1)TEM鑒定AEC-Ⅱ：可見特征性的微絨毛及嗜鋨性板層小體。(2)TEM檢測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài)：可見胞質(zhì)回縮,染色質(zhì)凝聚、邊聚,細(xì)胞表面微絨毛稀少,嗜鋨性板層小體排空。(3)FCM檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率：H202建模后細(xì)胞凋亡率顯著增加,且隨建模時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸上升。(4)基因芯片篩選凋亡相關(guān)1miRNA:與TO相比,T24細(xì)胞伴有多種miRNA的差異表達(dá)：28個(gè)miRNA表達(dá)明顯上調(diào),10個(gè)1miRNA表達(dá)明顯下調(diào),其中rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-200a/c-3p及rno-miR-21-5p等13個(gè)miRNA與凋亡密切相關(guān)。(5)Real-time PCR驗(yàn)證凋亡相關(guān)miRNA:選取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34c-5p、rno-miR-21-5p進(jìn)行Real-time PCR檢測(cè),三者表達(dá)水平均明顯下調(diào),結(jié)果與芯片結(jié)果一致。(6)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)靶基因：選取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-21-5p進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),預(yù)測(cè)結(jié)果提示：rno-miR-449a-5p的靶基因可能是Ccne2; rno-miR-34b/c-5p的靶基因可能是Bcl2; rno-miR-21-5p的靶基因可能有Bcl2、Pdcd4、PTEN及Fasl。 結(jié)論：(1)篩選并驗(yàn)證了AEC-Ⅱ凋亡相關(guān)miRNA。(2)miR-34家族可能是AEC-Ⅱ凋亡調(diào)控的主要參與者。(3) rno-miR-21-5p可能是AEC-Ⅱ內(nèi)重要的抗凋亡基因。
[Abstract]:Objective: to screen and verify the apoptosis of alveolar type 鈪，

本文編號(hào)：1952757