本文選題：肺泡Ⅱ型上皮細胞 + 凋亡��； 參考：《遵義醫(yī)學院》2013年碩士論文

【摘要】：目的：篩選并驗證肺泡Ⅱ型上皮細胞(alveolar type Ⅱ epithelial cell, AEC-Ⅱ)凋亡相關microRNA(miRN A)。 方法：(1)模型建立：分離、純化、鑒定并原代培養(yǎng)AEC-H36h,0.5mmol/L H2O2誘導建立AEC-Ⅱ凋亡模型。(2)凋亡檢測：分別于建模前(TO)、建模后2.5h(T2.5)、6h(T6)、12h(T12)及24h(T24)收集細胞,流式細胞術(FCM)檢測細胞早期凋亡率,透射電子顯微鏡(TEM)檢測細胞凋亡形態(tài)。(3)基因芯片篩選凋亡相關miRNA:分別于TO及T24收集細胞行miRNA芯片檢測,比較兩個時間點miRNA表達譜的差異,并從差異表達的miRNA中篩選凋亡相關miRNA=(4) Real-time PCR驗證凋亡相關miRNA:選取3個凋亡相關miRNA行Real-time PCR檢測,以驗證基因芯片結果的準確性。(5)生物信息學方法預測靶基因：綜合運用TargetScan、miRecords、TarBase、miRTarBase預測經(jīng)驗證的miRNA的靶基因,并從預測結果中篩選凋亡相關靶基因。 結果：(1)TEM鑒定AEC-Ⅱ：可見特征性的微絨毛及嗜鋨性板層小體。(2)TEM檢測細胞凋亡形態(tài)：可見胞質(zhì)回縮,染色質(zhì)凝聚、邊聚,細胞表面微絨毛稀少,嗜鋨性板層小體排空。(3)FCM檢測細胞早期凋亡率：H202建模后細胞凋亡率顯著增加,且隨建模時間延長而逐漸上升。(4)基因芯片篩選凋亡相關1miRNA:與TO相比,T24細胞伴有多種miRNA的差異表達：28個miRNA表達明顯上調(diào),10個1miRNA表達明顯下調(diào),其中rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-200a/c-3p及rno-miR-21-5p等13個miRNA與凋亡密切相關。(5)Real-time PCR驗證凋亡相關miRNA:選取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34c-5p、rno-miR-21-5p進行Real-time PCR檢測,三者表達水平均明顯下調(diào),結果與芯片結果一致。(6)生物信息學方法預測靶基因：選取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-21-5p進行靶基因預測,預測結果提示：rno-miR-449a-5p的靶基因可能是Ccne2; rno-miR-34b/c-5p的靶基因可能是Bcl2; rno-miR-21-5p的靶基因可能有Bcl2、Pdcd4、PTEN及Fasl。 結論：(1)篩選并驗證了AEC-Ⅱ凋亡相關miRNA。(2)miR-34家族可能是AEC-Ⅱ凋亡調(diào)控的主要參與者。(3) rno-miR-21-5p可能是AEC-Ⅱ內(nèi)重要的抗凋亡基因。
[Abstract]:Objective: to screen and verify the apoptosis of alveolar type 鈪，

本文編號：1952757