本文選題：解整合素-金屬蛋白酶　切入點：哮喘　出處：《上海交通大學學報(醫(yī)學版)》2014年07期

【摘要】：目的探討解整合素-金屬蛋白酶33(ADAM33)對人氣道平滑肌細胞(HASMCs)增殖和凋亡的作用,以及白介素-4(IL-4)對ADAM33表達的影響。方法分別以1、10、50和100 ng/mL濃度的IL-4刺激HASMCs,以未刺激細胞組作為對照,分別采用Real-Time PCR和Western blotting法檢測ADAM33 mRNA和蛋白的表達。設計并合成ADAM33-siRNA,瞬時轉染HASMCs,Real-Time PCR法和Western blotting法篩選出抑制率最高的siRNA,以抑制率最高的siRNA瞬時轉染HASMCs;MTS和流式細胞術分別檢測細胞的增殖和凋亡情況。結果當不同濃度的IL-4刺激HASMCs時,ADAM33 mRNA和蛋白的表達均呈濃度依賴性。與對照組比較,IL-4濃度為50 ng/mL組和100 ng/mL組mRNA和蛋白的相對表達量分別增加了5.94、7.6倍和3.72、4.57倍,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);但1 ng/mL組和10 ng/mL組無明顯升高,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。在3條干擾RNA中,ADAM33-siRNA-575的抑制效率最高,在mRNA水平的抑制率為81.08%。在24、48和72 h,干擾組的細胞增殖明顯低于陰性對照組(P0.05),增殖抑制率分別為15.38%、32.83%和22.78%;干擾組的細胞凋亡率為(25.88±3.37)%,明顯高于陰性對照組的(8.95±0.51)%(P0.05)。結論 ADAM33可促進HASMCs增殖,而細胞因子IL-4可促進其表達,兩者可能在氣道重塑中起著重要的作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of integrin-metalloproteinase-33 (ADAM33) on proliferation and apoptosis of human airway smooth muscle cells (HASMCs) and the effect of interleukin-4 (IL-4) on the expression of ADAM33.Methods the expression of ADAM33 mRNA and protein were detected by Real-Time PCR and Western blotting in the unstimulated cells group and the unstimulated cells group, respectively. The HASMCs were stimulated with IL-4 at the concentrations of 1 ng/mL and 100 ng/mL, and the expression of ADAM33 mRNA and protein were detected by Real-Time PCR and Western blotting respectively.ADAM33-siRNAs were designed and synthesized. The siRNAs with the highest inhibition rate were screened by transient transfection of HASMCsSU Real-Time PCR and Western blotting. The proliferation and apoptosis of the cells were detected by flow cytometry and transient transfection of siRNA with the highest inhibition rate.Results the expression of ADAM33 mRNA and protein was in a concentration-dependent manner when HASMCs was stimulated with different concentrations of IL-4.Compared with the control group, the relative expression of mRNA and protein in 50 ng/mL group and 100 ng/mL group increased 5.947.6-fold and 3.72U 4.57 times, respectively, and the difference was statistically significant (P 0.05), but 1 ng/mL group and 10 ng/mL group had no significant increase, the difference was not statistically significant (P 0.05).Among the three interfering RNA, ADAM33-siRNA-575 had the highest inhibitory efficiency, and the inhibition rate at mRNA level was 81.08%.At 24: 48 and 72 h, the cell proliferation in the interference group was significantly lower than that in the negative control group (P 0.05), the inhibition rate of proliferation was 15.38% and 32.83%, and the cell apoptosis rate in the interference group was 25.88 鹵3.37%, which was significantly higher than that in the negative control group (P 0.05).Conclusion ADAM33 can promote the proliferation of HASMCs and cytokine IL-4 can promote its expression. Both of them may play an important role in airway remodeling.
【作者單位】： 重慶市涪陵中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：重慶市衛(wèi)生局基金(07-2-222)~~
【分類號】：R562.25

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