本文關(guān)鍵詞： Caveolin-1 香煙煙霧提取物 粘蛋白 MUC5AC　出處：《中南大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：氣道粘液高分泌是許多慢性氣道炎癥疾病加重與進展的重要因素,MUC5AC是氣道中最重要分泌型粘蛋白。最近實驗顯示EGFR-PI3K細胞信號通路在脂多糖或中性粒細胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)氣道上皮細胞MUC5AC基因高表達中有重要作用。吸煙是慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases, COPD)的一個重要病因,其中許多物質(zhì)造成氣道高分泌。我們推測香煙煙霧引起氣道上皮粘液高分泌很可能同樣與EGFR-PI3K信號通路密切相關(guān)。小窩蛋白-1(caveolin-1)是一個胞膜上小窩結(jié)構(gòu)的標志蛋白,廣泛表達于多種細胞,作為多種細胞信號的樞紐,參與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控,介導(dǎo)細胞生理或病理過程。近年,Caveolin-1被認為是炎癥反應(yīng)中重要調(diào)節(jié)分子,參與氣道炎癥發(fā)生、發(fā)展。而目前尚未見caveolin-1在氣道粘液高分泌中作用的報道。我們期望通過本研究探討香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract, CSE)誘導(dǎo)氣道粘蛋白MUC5AC高分泌的機制,理解caveolin-1在其中的作用。 目的：探討CSE誘導(dǎo)氣道粘蛋白MUC5AC高分泌的發(fā)生機制；了解caveolin-1對氣道粘蛋白MUC5AC高分泌過程的調(diào)控作用；闡明caveolin-1參與氣道粘蛋白MUC5AC高分泌調(diào)控的可能分子機制。 方法：(1)利用CSE刺激氣道上皮細胞HBE16構(gòu)建氣道粘液高分泌體外模型。觀察CSE刺激后細胞活性抑制情況,RT-PCR檢測MUC5AC mRNA的表達,ELISA蛋白分泌,(?)MUC5AC檢測Western blotting磷酸化,(?)EGFR, EGFI磷酸化蛋白的表達情況。Akt, Akt采用抑制劑(AG1478)和PI3K抑制劑(LY294002)預(yù)處理氣EGFR道上皮細胞觀察其對CSE誘導(dǎo)的HBE16,磷酸化,MUC5AC, EGFR, EGFR磷酸化表達的影響。(2)分別轉(zhuǎn)染Akt, Akt過表caveolin-1達質(zhì)粒至氣道上皮細胞和用小窩抑制劑甲基β環(huán)糊精HBE16預(yù)處理氣道上皮細胞(Methyl-β-cyclodextrin, MβCD)再以CSE刺激氣30min,道上皮細胞檢測HBE16, RT-PCH的表達,(?)MUC5AC mRNA法ELISA檢測蛋白分泌,(?)MUC5AC檢測Western blotting磷酸化,caveolin-1, EGFR, EGFR磷酸化蛋白的表達。用Akt, Akt和AG1478特異性阻斷LY294002和PI3K后,再檢測上述指標的表達。EGFR結(jié)果：(1)成功構(gòu)建氣道粘液高分泌體外模型； 處理氣道10%CSE上皮細胞24h后及蛋白表達明顯增加,MUC5AC mRNA磷酸化EGFR及Akt磷酸化增加；預(yù)處理后明顯降低AG1478誘導(dǎo)氣道上皮細胞CSE中及蛋白表達、MUC5AC mRNA磷酸化及Akt磷酸化水平；EGFR預(yù)處理后,LY294002誘導(dǎo)的CSE及蛋白表達和MUC5AC mRNAAkt磷酸化下降,但EGFR磷酸化無改變。(2)氣道上皮細胞HBE16轉(zhuǎn)染caveolin-1過表達質(zhì)粒,能夠上調(diào)CSE誘導(dǎo)的MUC5AC mRNA及蛋白表達和EGFR磷酸化及Akt磷酸化水平；采用MβCD預(yù)處理后,能下調(diào)CSE誘導(dǎo)的上述指標的表達。AG1478預(yù)處理后能明顯減低上述情況下的MUC5AC mRNA及蛋白表達、EGFR磷酸化及Akt磷酸化；LY294002能顯著減少上述情況下的MUC5AC mRNA、MUCAC蛋白及Akt磷酸化的表達。 結(jié)論：(1)CSE誘導(dǎo)氣道粘蛋白MUC5AC高分泌與信號通路EGFR-PI3K-Akt有關(guān)。(2)Caveolin-1調(diào)節(jié)CSE誘導(dǎo)氣道上皮細胞粘蛋白高分泌,可能是通過誘導(dǎo)EGFR磷酸化,激活PI3K-Akt信號通路發(fā)揮作用。
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本文編號：1509229