發(fā)布時(shí)間：2018-01-31 23:43

  本文關(guān)鍵詞： 蟑螂 Blag7 T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4 樹(shù)突狀細(xì)胞 Th2向極化 蟑螂 Blag7 Toll樣受體4 樹(shù)突狀細(xì)胞 絲裂原活化蛋白激酶　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：基于哮喘病人和哮喘動(dòng)物模型的研究已經(jīng)廣泛證明Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，譬如IL-4，IL-5和IL-13等，它們最終促進(jìn)了包括氣道炎癥，粘液分泌過(guò)多，氣道高反應(yīng)性等在內(nèi)的哮喘發(fā)生。然而，由過(guò)敏原誘導(dǎo)的促使初始T細(xì)胞分化為Th2類細(xì)胞的機(jī)制目前仍不明確。 樹(shù)突狀細(xì)胞在受到外來(lái)抗原刺激成熟后，能夠促使初始T細(xì)胞分化為Th1或者Th2類細(xì)胞。目前如何使得抗原特異性Th2類細(xì)胞極化，以及在過(guò)敏情況下保持Th2類細(xì)胞穩(wěn)態(tài)依然未知。最新的研究表明樹(shù)突狀細(xì)胞能夠表達(dá)T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4,它能夠與其配體T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白1相結(jié)合從而促進(jìn)Th2細(xì)胞分化。這一研究為研究過(guò)敏性疾病的機(jī)制提供了一些幫助。 T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白(T cell immunoglobulin mucindomain,TIM4)是一種表達(dá)與細(xì)胞表面的蛋白，它能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞的效應(yīng)。越來(lái)越多的數(shù)據(jù)證實(shí)多種T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白分子在Th1和Th2型免疫反應(yīng)中起了重要的作用。其中，樹(shù)突狀細(xì)胞分泌的T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白4已經(jīng)被證實(shí)能夠促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分化為Th2細(xì)胞，而且在外源性抗原刺激后T細(xì)胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白的表達(dá)能夠顯著性升高，但是它在過(guò)敏性疾病中的角色作用目前仍不清楚。 多種炎癥細(xì)胞及免疫細(xì)胞參與的氣道炎癥是過(guò)敏性氣道疾病的本質(zhì)。廣泛存在于免疫細(xì)胞表面的Toll樣受體，無(wú)疑可以作為危險(xiǎn)因素與機(jī)體反應(yīng)間的重要媒介。Toll樣受體是一種保守的模式識(shí)別受體家族中的一種，它能夠識(shí)別特異性的微生物和允許宿主細(xì)胞區(qū)分自我和非自身分子。樹(shù)突狀細(xì)胞能夠表達(dá)多種Toll樣受體，譬如TLR2，TLR3等。細(xì)菌等外源性刺激能夠激活TLR從而初始免疫反應(yīng)，促進(jìn)抗原適應(yīng)免疫以應(yīng)對(duì)外源性病原體。研究發(fā)現(xiàn)，TLRs廣泛分布在參與哮喘發(fā)病的免疫細(xì)胞上，以來(lái)胚系基因編碼的保守序列參與宿主防御、調(diào)節(jié)免疫和誘導(dǎo)耐受，與哮喘的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 蟑螂在世界各地已經(jīng)被證實(shí)可以促發(fā)過(guò)敏及其特異性哮喘。在我們?nèi)粘Ｉ钪凶畛Ｒ?jiàn)的蟑螂種類則是德國(guó)小蠊和美洲大蠊。在過(guò)去的數(shù)十年了，多種德國(guó)小蠊過(guò)敏原（Bla g1, Bla g2, Bla g4, Bla g5, Bla g6, Bla g7and Bla g8)均已經(jīng)被克隆表達(dá)。它們其中，Bla g7是一種肌球蛋白，是一種泛過(guò)敏原且能與血清IgE結(jié)合。Bla g7與另一種美洲大蠊的肌球蛋白Per a7有著非常相似的蛋白結(jié)構(gòu)，而Per a7已經(jīng)被報(bào)道能夠促進(jìn)肥大細(xì)胞系P815釋放Th2類細(xì)胞因子IL-4與IL-13，因此我們預(yù)測(cè)Bla g7可能同樣通過(guò)與TLR接觸并發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，具有促進(jìn)Th2類細(xì)胞因子釋放的效應(yīng)。樹(shù)突狀細(xì)胞是最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，它能夠促進(jìn)Th2類極化導(dǎo)致過(guò)敏的初始，在本次試驗(yàn)中我們主要研究Bla g7刺激樹(shù)突狀細(xì)胞以及它背后的機(jī)制。本次試驗(yàn)的目的主要是想證明Bla g7能夠通過(guò)促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)TIM4，繼而促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分化為Th2細(xì)胞，以及Bla g7發(fā)揮免疫性效應(yīng)是通過(guò)TLR方式。 第一部分重組德國(guó)小蠊過(guò)敏原Bla g7通過(guò)促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)TIM4蛋白誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞Th2向分化 背景：蟑螂過(guò)敏原作為一個(gè)主要的戶內(nèi)過(guò)敏原，它能夠促使過(guò)敏性鼻炎和哮喘發(fā)生，但是這背后的機(jī)制目前仍不明確。 方法：采用重組Bla g7蛋白激發(fā)樹(shù)突狀細(xì)胞。使用定量PCR和Westernblotting方法檢測(cè)激發(fā)后TIM4的mRNA以及蛋白水平的表達(dá)。將磁珠分離后CD4+陽(yáng)性T細(xì)胞與Bla g7激發(fā)活化的樹(shù)突狀細(xì)胞共培養(yǎng)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+陽(yáng)性T細(xì)胞的分化情況。采用特異性的抑制劑驗(yàn)證T細(xì)胞極化。 結(jié)果：采用重組Bla g7激發(fā)后，樹(shù)突狀細(xì)胞表面共刺激分子CD80, CD86以及TIM4的表達(dá)升高。Bla g7能夠誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞分泌IL-13，這一效應(yīng)是通過(guò)TIM4，CD80和CD86依賴的方式。將Bla g7激發(fā)活化后的樹(shù)突狀細(xì)胞與CD4陽(yáng)性T細(xì)胞共培養(yǎng)后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞胞內(nèi)IL-4與IFN-γ表達(dá)情況，鑒定T細(xì)胞Th2向極化情況，同時(shí)上清液中的IL-13含量升高。抗TIM4，CD80和CD86抗體能夠分別抑制Bla g7誘導(dǎo)的Th2向分化以及IL-13釋放，提示Blag7誘導(dǎo)Th2向是通過(guò)TIM4，CD80和CD86依賴方式。 結(jié)論：蟑螂過(guò)敏原Bla g7通過(guò)調(diào)節(jié)樹(shù)突狀細(xì)胞細(xì)胞因子釋放，激發(fā)樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞Th2向極化，在過(guò)敏性疾病發(fā)生中起了重要的作用 第二部分重組德國(guó)小蠊過(guò)敏原促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞TLR4受體表達(dá)以及通過(guò)MAPK通路促進(jìn)細(xì)胞因子釋放 背景：蟑螂過(guò)敏原能夠促發(fā)過(guò)敏以及特異性哮喘。Toll樣受體在固有免疫和適應(yīng)性免疫中起了重要的作用。我們假設(shè)蟑螂過(guò)敏原Bla g7能夠扮演TLR4受體激動(dòng)劑，同時(shí)它能夠與TLR4結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。本項(xiàng)研究主要想解釋Blag7與TLR4在過(guò)敏中的相互作用以及背后機(jī)制。 方法：采用純化后不同濃度Bla g7激發(fā)樹(shù)突狀細(xì)胞，使用Western-blotting和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樹(shù)突狀細(xì)胞表面分子CD80，CD86，HLA-DR和TLR4的表達(dá)。采用Western-blotting檢測(cè)TLR4的蛋白表達(dá)情況。T細(xì)胞與Bla g7活化的樹(shù)突狀細(xì)胞共培養(yǎng)，采用CCK-8法檢測(cè)T細(xì)胞的增殖情況。采用Western-blotting法檢測(cè)TLR下游MAPK信號(hào)通路，采用相應(yīng)抑制劑來(lái)反向驗(yàn)證MAPK通路。 結(jié)果：以不同濃度Bla g7激發(fā)來(lái)自于健康人群和過(guò)敏人群的樹(shù)突狀細(xì)胞，，均能夠顯著增加HLA-DR和共刺激分子的表達(dá)。Bla g7活化的樹(shù)突狀細(xì)胞與T細(xì)胞共培養(yǎng)后能夠顯著促進(jìn)T細(xì)胞增殖。Bla g7激發(fā)后，樹(shù)突狀細(xì)胞TLR4的以濃度依賴方式表達(dá)升高，抗Bla g7單克隆抗體可以拮抗這一效應(yīng)。采用免疫共沉淀技術(shù)證明Bla g7能夠結(jié)合細(xì)胞膜表面TLR4，進(jìn)而活化MAPK和NF-κB通路。Bla g7能夠促進(jìn)細(xì)胞因子IL-4，IL-5以及IL-13的釋放，其中來(lái)自于過(guò)敏人群的樹(shù)突狀細(xì)胞分泌能力強(qiáng)于正常人群。 結(jié)論：TLR4是樹(shù)突狀細(xì)胞處理抗原Bla g7的重要媒介，Bla g7通過(guò)TLR4方式誘導(dǎo)細(xì)胞因子釋放發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Mey-Fann Lee;DepanmentofEducationandResearchTaichungVeteransGeneralHospital;Taiwan;;Molecular Characteristics of Cockroach Allergens[J];Cellular & Molecular Immunology;2005年03期

2 馬文靜;張偉;魏繼福;張浩;劉成成;何韶衡;;蟑螂主要過(guò)敏原Bla g7單克隆抗體的制備與鑒定[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2011年04期

3 ;Key role of mast cells and their major secretory products in inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2004年03期

本文編號(hào)：1480312