本文關鍵詞： 甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯 人支氣管上皮細胞 DNA甲基化沉默基因 甲基化芯片 OPCML基因 全基因組DNA甲基化　出處：《中國疾病預防控制中心》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯(Glycidyl Methacrylate,簡稱GMA),是丙烯酸酯膠的主要組分,含有碳碳雙鍵和環(huán)氧基團,可參與離子型和自由基型反應,具有高反應活性。它作為一種聚合用單體,在樹脂、涂料、粘合劑、塑料等工業(yè)中得到廣泛應用。既往研究表明,GMA屬低毒類,體外多項致突變試驗結果呈陽性、具有生殖發(fā)育毒性,可誘導金倉鼠細胞(SHE)、正常人胚肺成纖維細胞和支氣管上皮(16HBE)細胞等多種哺乳類細胞發(fā)生惡性轉化,具有潛在致癌性,并且GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中伴隨基因DNA甲基化的改變。DNA甲基化常出現(xiàn)在抑癌基因的啟動子,直接或間接影響基因表達,這種DNA修飾方式并未改變基因序列,但能關閉某些基因活性,進而導致細胞侵襲、異常增殖,促進腫瘤發(fā)生。DNA甲基化修飾導致的基因沉默在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中普遍存在,與腫瘤遺傳學改變不同,DNA甲基化是一種可逆的過程。 本研究通過篩選GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因,分析DNA甲基化沉默基因在細胞惡性轉化過程中狀態(tài)的改變,進一步探討GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中的DNA甲基化機制。以8μg/ml GMA染毒16HBE細胞(DMSO作為溶劑對照),每次染毒72h,間隔24h,連續(xù)染毒3次,染毒結束后計為第1代細胞,連續(xù)培養(yǎng)細胞至第30代,期間采用刀豆凝集素A(ConA)凝集試驗和錨著非依賴性(AIG)試驗對惡性轉化細胞進行生物學特性鑒定。收集轉化第10代、第20代、第30代未經和經甲基化轉移酶抑制劑(5-Aza-cdr,5mol/L)處理的GMA染毒細胞(GMA組、GMA+抑制劑組)以及同步DMSO組細胞,采用NimbleGen公司生產的"NimbleGen HG18CpG Promoter Microarray Methlation"甲基化芯片篩選GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因,進行KEEG通路分析；分析各時點DNA甲基化沉默基因的狀態(tài)改變,并進行KEEG通路分析,采用qPCR檢測轉化不同時點OPCML基因表達水平的變化；應用DNA甲基化定量檢測試劑盒(MethylFlashTM Methylated DNA Quantification Kit (Colorimetric))測定GMA誘導細胞轉化過程中細胞全基因組DNA甲基化水平。 1GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中不同時點DNA甲基化沉默基因的分析 GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中,轉化第10代、第20代、第30代分別有821、75、44個甲基化沉默基因,涉及有統(tǒng)計學意義的通路分別是26、1、3個,未見各時點均沉默的甲基化基因。 2GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中DNA甲基化沉默基因狀態(tài)變化的分析 GMA致16HBE細胞惡性轉化過程中,第10代轉化細胞發(fā)生而第20代、30代未發(fā)生DNA甲基化沉默的基因有801個,其涉及有統(tǒng)計學意義的通路25個；第20代轉化細胞發(fā)生而第10代、30代未發(fā)生DNA甲基化沉默的基因有66個,其涉及有統(tǒng)，

本文編號：1480441