本文關(guān)鍵詞： 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1 肺 纖維化 大鼠 比格犬　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景:胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,IGFBPr P1)即胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7),廣泛分布于正常人體各組織器官,能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附、血管形成和刺激前列腺素合成,在多種組織細(xì)胞的增殖、分化、衰老、凋亡等病理生理過程中起重要作用。導(dǎo)師課題組前期研究發(fā)現(xiàn)IGFBPr P1是一種新的致肝纖維化因子,可刺激肝組織產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta 1,TGFβ1),與TGFβ1相互調(diào)節(jié),互為因果,共同促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。TGFβ1屬TGFβ超家族,具有多重生物學(xué)作用,如調(diào)節(jié)細(xì)胞發(fā)育、黏附、遷移、免疫應(yīng)答、創(chuàng)傷修復(fù)、炎癥以及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的生成及降解等,是目前公認(rèn)的最強(qiáng)致纖維化因子,與肝、肺纖維化密切相關(guān)。因此推測IGFBPr P1可能對肺組織亦有影響。目前類似報(bào)道鮮見,為此本實(shí)驗(yàn)采用尾靜脈注射攜帶IGFBPr P1基因的腺病毒載體至SD大鼠及硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)皮下注射比格犬構(gòu)建肝纖維化動物模型,研究IGFBPr P1對肺組織的影響及其意義。目的:探討IGFBPr P1對SD大鼠及比格犬肺組織的作用及其可能機(jī)制。方法:1、60只健康清潔級雄性SD大鼠,5~6w齡,體重120~150 g,隨機(jī)分為3組:A組(n=10):即正常對照組,尾靜脈單次注射同等劑量0.9%Na Cl注射液;B組(n=25):即Ad-EGFP組,尾靜脈單次注射腺病毒包裝的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(adenovirus-enhanced green fluorescent protein,Ad-EGFP)4×109pfu/只;C組(n=25):即Ad-IGFBPr P1組,尾靜脈單次注射腺病毒包裝的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(adenovirus-insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,Ad-IGFBPr P1)4×109pfu/只。各組大鼠分別于注射腺病毒后1w、2w、4w、6w、9 w末行乙醚吸入麻醉,留取左肺葉待測。2、18只8月齡健康雄性比格犬,體重9~11kg,隨機(jī)分為3組:D組(n=6):即正常組,正常飼養(yǎng)12w,未予特殊處理;E組(n=6):即TAA組,予TAA皮下注射12mg/kg/只,每周2次,持續(xù)12w;F組(n=6):即TAA+IGFBPr P1抗體組,予TAA皮下注射12 mg/kg/只,每周2次,持續(xù)12w,5w起同時予門靜脈注射IGFBPr P1抗體,5μg/kg/只,每周1次。于12w末行1.5%戊巴比妥鈉靜脈麻醉,留取各犬肺組織待測。課題組前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)采用以上C組及E組相同處理方法可成功誘導(dǎo)SD大鼠及比格犬肝纖維化。行蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE)觀察SD大鼠及比格犬肺組織病理形態(tài)學(xué)變化;苦味酸-天狼猩紅染色(Sirius Red staining)觀察SD大鼠及比格犬肺組織膠原纖維形成情況;免疫組織化學(xué)染色(immunohistochemical staining,IHC)檢測SD大鼠肺組織IGFBPr P1、白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、TGFβ1、纖維連接蛋白(fibronectin,FN)以及比格犬肺組織IGFBPr P1的分布及表達(dá)。結(jié)果:1 SD大鼠:1.1 HE染色結(jié)果:正常組及Ad-EGFP組各大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整清晰;Ad-IGFBPrP1組轉(zhuǎn)染1w時,部分肺泡腔出現(xiàn)少量炎性細(xì)胞;轉(zhuǎn)染2w時炎細(xì)胞侵及肺泡間隔及支氣管壁,并伴有少量支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞(即支氣管粘膜上皮細(xì)胞)脫落;4w時,肺泡腔、肺泡間隔及支氣管周圍有大量炎細(xì)胞浸潤,同時部分肺泡壁、肺泡間隔開始增厚、增寬;轉(zhuǎn)染6w時炎細(xì)胞逐漸減少,肺泡間隔、肺泡壁逐漸增厚;9w時肺泡壁、肺泡間隔顯著增寬,膠原纖維增多,甚至出現(xiàn)部分肺組織結(jié)構(gòu)破壞。1.2 Sirius Red染色結(jié)果:與正常對照組及Ad-EGFP組相比,Ad-IGFBPr P1組大鼠隨IGFBPr P1作用時間延長,肺組織血管壁、支氣管壁及肺泡間隔紅染膠原纖維逐漸增多,9w最甚。與正常對照組、Ad-EGFP組及Ad-IGFBPr P1組1w、2w、4w、6w相比,Ad-IGFBPr P1組9w肺組織膠原纖維顯著增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。1.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:(1)IGFBPr P1:正常對照組及Ad-EGFP組中IGFBPr P1僅少量于支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞胞漿表達(dá),染色呈淡黃色;Ad-IGFBPr P1組在支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞胞漿可見IGFBPr P1大量表達(dá),呈棕黃色。與正常對照組、Ad-EGFP組和Ad-IGFBPr P1組1w、9w相比,Ad-IGFBPr P1組2w、4w、6w的IGFBPr P1蛋白表達(dá)量明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)IL-1β:正常對照組及Ad-EGFP組中僅在個別巨噬細(xì)胞胞漿中可見IL-1β的表達(dá);Ad-IGFBPr P1組各時間點(diǎn)巨噬細(xì)胞胞漿IL-1β表達(dá)量明顯增多,呈棕褐色顆粒。與正常對照組、Ad-EGFP組和Ad-IGFBPr P1組1w、9w相比,Ad-IGFBPr P1組2w、4w、6w的IL-1β蛋白表達(dá)量明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(3)TGFβ1:TGFβ1表達(dá)部位與IGFBPr P1相同。與正常對照組、Ad-EGFP組相比,Ad-IGFBPr P1組1w、2w、4w、6w、9w的TGFβ1蛋白表達(dá)量增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(4)FN:正常對照組及Ad-EGFP組中FN僅少量表達(dá)于支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞胞漿,染色淡;Ad-IGFBPr P1組于支氣管纖毛柱狀上皮細(xì)胞及支氣管周間質(zhì)細(xì)胞胞漿可見FN大量表達(dá)。與正常對照組、Ad-EGFP組及Ad-IGFBPr P1組1w、2w、4w、6w相比,Ad-IGFBPr P1組9w的FN蛋白表達(dá)量明顯增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2比格犬:2.1 HE染色結(jié)果:正常組比格犬肺組織結(jié)構(gòu)完整,無炎性改變及膠原沉積。TAA組比格犬肺泡腔、肺泡間隔及支氣管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤,肺泡壁、肺泡間隔明顯增厚,部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞。TAA+IGFBPr P1抗體組病變程度較TAA組顯著減輕。2.2 Sirius Red染色結(jié)果:正常組比格犬肺組織血管壁、支氣管壁可見少量紅染膠原纖維;TAA組肺組織血管壁、支氣管壁紅染膠原纖維增多,肺泡間隔可見膠原沉積,TAA+IGFBPr P1抗體組紅染膠原纖維較TAA組少,較正常組多,差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:IGFBPr P1在TAA組(1.39±0.20)、TAA+IGFBPr P1抗體組(1.05±0.16)的表達(dá)較正常組(0.50±0.14)明顯增多,TAA+IGFBPr P1抗體組IGFBPr P1蛋白表達(dá)較TAA組減少,以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.腺病毒介導(dǎo)的IGFBPr P1對SD大鼠肺組織有炎性損傷甚至促纖維化作用,IGFBPr P1在TAA誘導(dǎo)比格犬肺組織炎性損傷及纖維化過程中發(fā)揮了部分作用;2.IGFBPr P1可能是一種無組織器官特異性的致病因子。
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【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2;R563

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1479565