本文關(guān)鍵詞：胍丁胺在內(nèi)毒素性肺損傷中的治療作用和抗氧化機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景急性呼吸窘迫綜合征ARDS(acute respiratory distress syndrome)是由過(guò)度炎癥引起的一種急性、彌漫性肺損傷,主要臨床表現(xiàn)為低氧血癥、急性或進(jìn)展性呼吸困難和非心源性肺水腫。4年前制定的國(guó)際新標(biāo)準(zhǔn)已取消了ALI/ARDS的概念,而把此病統(tǒng)一稱(chēng)作ARDS。作為一種死亡率居高不下的臨床危重癥疾病,該病的預(yù)防和治療研究一直備受重視。近年來(lái),雖然在藥物療法、保護(hù)性機(jī)械通氣以及氣道管理等方面取得了一些進(jìn)展,但因其發(fā)病機(jī)制仍未完全明確,疾病的最終治療效果并無(wú)顯著改善。氧化應(yīng)激被認(rèn)為是肺部過(guò)度炎癥發(fā)生和發(fā)展的關(guān)聯(lián)機(jī)制,由其所介導(dǎo)的組織損傷是ARDS病變過(guò)程中的重要事件,而肺組織中的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是ARDS時(shí)肺內(nèi)活性氧ROS(Reactiveoxygenspecies)產(chǎn)生的最主要來(lái)源。胍丁胺(agmatine,AGM)是由精氨酸脫羧形成的生物胺,經(jīng)前期研究證實(shí),在脂多糖(LPS)引導(dǎo)的小鼠急性呼吸窘迫綜合征實(shí)驗(yàn)中,胍丁胺可以發(fā)揮抗炎效應(yīng)并顯著提高生存率。在此基礎(chǔ)上,本項(xiàng)目圍繞 胍丁胺可能通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞過(guò)度氧化反應(yīng)從而在內(nèi)毒素性肺損傷中發(fā)揮保護(hù)作用‖的設(shè)想,研究胍丁胺對(duì)LPS所致大鼠ARDS的保護(hù)作用,以PI3K/Akt、Nrf2/HO-1信號(hào)通路為對(duì)象,研究胍丁胺影響巨噬細(xì)胞ROS生成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,并進(jìn)一步明確了HO-1終產(chǎn)物膽紅素(bilirubin)是否參與胍丁胺的抗氧化功能。旨在明確胍丁胺針對(duì)內(nèi)毒素肺損傷所發(fā)揮治療和保護(hù)效應(yīng)的機(jī)理,同時(shí)為深入認(rèn)識(shí)體內(nèi)內(nèi)源性生物胺參與外周抗炎作用與調(diào)控機(jī)制提供新的理論基礎(chǔ),為探尋利用機(jī)體自身生物學(xué)物質(zhì)、改善ARDS治療提供新思路。材料與方法(1)胍丁胺對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠ARDS的治療保護(hù)作用采用氣管內(nèi)注射法給藥建模。將100只雄性SD大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、LPS組、AGM治療組和AGM組,每組25只。第一次給藥:對(duì)照組給予生理鹽水0.1ml,LPS組給予3mg/kg LPS 0.1ml,AGM治療組給予3mg/kg LPS 0.1ml,AGM組給予5mg/kg AGM 0.1ml;30分鐘后第二次給藥:對(duì)照組、LPS組和AGM組皆給予生理鹽水0.1ml,AGM治療組給予5mg/kg AGM 0.1ml。每組隨機(jī)選取10只,通過(guò)觀察4日存活率來(lái)評(píng)估AGM對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征大鼠的治療保護(hù)作用。每組隨機(jī)抽取5只動(dòng)物行鼠尾靜脈熒光標(biāo)記物注射。其余動(dòng)物于給藥后24小時(shí)處死采集肺組織標(biāo)本。通過(guò)比較肺泡灌洗液(BALF)和肺組織中炎癥因子表達(dá)水平以及中性粒細(xì)胞MPO水平來(lái)評(píng)估肺部炎癥變化情況;采用肺濕/干測(cè)定以及FITC-BSA熒光標(biāo)記法來(lái)評(píng)估通透性改變;通過(guò)肺組織HE染色觀察組織損傷改變;通過(guò)檢測(cè)肺組織抗氧化酶SOD活性和脂質(zhì)氧化(MDA)含量以及Western blot方法檢測(cè)HO-1表達(dá)來(lái)評(píng)估氧化應(yīng)激水平的變化。(2)以RAW264.7細(xì)胞為模型探討AGM在LPS誘導(dǎo)的過(guò)度氧化反應(yīng)中的抗氧化作用MTT法檢測(cè)存活率并選擇適合的給藥濃度。采用治療性給藥使胍丁胺作用于經(jīng)LPS刺激活化的RAW264.7細(xì)胞,在不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞蛋白�；瘜W(xué)比色法檢測(cè)SOD活性與MDA含量;Griess法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中NO的表達(dá);采用DCFH-DA熒光探針標(biāo)記活細(xì)胞測(cè)量其生成ROS的狀況;Western Blot檢測(cè)細(xì)胞中i NOS蛋白的含量。(3)AGM在LPS誘導(dǎo)活化的RAW264.7細(xì)胞中抗氧化作用的機(jī)制研究采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)α2腎上腺素能受體(α2-adrenoceptor)和咪唑啉受體(imidazoline receptor)I1R、I2R在AGM抗氧化調(diào)節(jié)中對(duì)HO-1表達(dá)的影響;用Western blot法檢測(cè)總AKt和磷酸化AKt的變化,觀察AKt抑制劑LY294002阻斷PI3K/Akt信號(hào)通路后,PI3K/Akt下游Nrf2活性和HO-1m RNA表達(dá)的變化以及ROS生成的情況;用WB方法測(cè)定轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在胞漿和胞核內(nèi)的表達(dá)情況,結(jié)合EMSA測(cè)定入核的Nrf2的DNA結(jié)合力;利用Zn PP阻斷HO-1通路,明確AGM的抗氧化功能與Nrf2/HO-1信號(hào)通路的密切程度;并通過(guò)胍丁胺量效測(cè)定HO-1催化終產(chǎn)物膽紅素(bilirubin)的變化以及對(duì)NO生成的影響,明確HO-1催化終產(chǎn)物與AGM的抗氧化作用的關(guān)系。結(jié)果(1)治療性地由氣管內(nèi)給予AGM使ARDS模型大鼠4日存活率顯著上升(P0.05);AGM治療組BALF與組織中TNF-α和IL6含量明顯減少;肺泡網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)損傷減輕,肺濕/干、MPO活性、MDA含量皆顯著下降,FITC標(biāo)記的熒光蛋白進(jìn)入肺內(nèi)的量明顯降低;肺內(nèi)SOD活性和HO-1表達(dá)水平顯著增加(P0.05)。(2)LPS刺激導(dǎo)致RAW264.7細(xì)胞i NOS蛋白的含量升高,ROS和NO大量生成,給予AGM治療可顯著緩解LPS所致ROS和NO生成(P0.05),提高SOD活性。(3)與LPS組相比,AGM治療可以增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)AKt磷酸化水平,Nrf2入核明顯增加,核內(nèi)Nrf2的DNA結(jié)合活力明顯增強(qiáng),HO-1表達(dá)顯著提高,ROS生成明顯降低(P0.05);LY294002和Zn PP都可以消除AGM對(duì)ROS的緩解作用;HO-1的催化終產(chǎn)物與AGM呈劑量依賴性變化;應(yīng)用相應(yīng)阻斷劑阻斷α2腎上腺素能和咪唑啉I1R、I2R不影響AGM所致HO-1水平變化。結(jié)論(1)胍丁胺能夠緩解LPS所致大鼠肺水腫,改善通透性,減輕過(guò)度炎癥,提高生存率,對(duì)ARDS具有治療保護(hù)效應(yīng)。(2)胍丁胺能夠減輕巨噬細(xì)胞炎癥因子釋放,增強(qiáng)抗氧化酶SOD活性,降低ROS和NO生成,表明胍丁胺可以調(diào)控巨噬細(xì)胞抗炎、抗氧化功能發(fā)揮治療效應(yīng)。(3)PI3K/Akt、Nrf2/HO-1途徑以及HO-1催化終產(chǎn)物皆參與了AGM對(duì)LPS誘導(dǎo)的過(guò)度氧化反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R563.8

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1 李勁彤;張振清;李錦;阮金秀;;胍丁胺衍生化檢測(cè)方法及其在藥理學(xué)研究中的應(yīng)用[J];藥物分析雜志;2004年01期

2 Chanzy S.,Moretti S. ,Mayet H. ,劉莉;洛哌丁胺致兒童意識(shí)喪失1例[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(兒科學(xué)分冊(cè));2005年01期

3 齊金剛;侯長(zhǎng)毅;趙秉坤;;洛哌丁胺治療腹瀉型腸易激綜合征[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2006年04期

4 詹倩;楊文銀;曹建國(guó);;沙丁胺醇對(duì)血鉀濃度的影響及其兩面性[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2008年16期

5 徐慶中;陳啟瑞;張國(guó)慶;;雙苯次甲丁胺的合成[J];醫(yī)藥工業(yè);1983年03期

6 謝建林;洛哌丁胺消除運(yùn)動(dòng)引起口至盲腸通過(guò)的加快[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));1994年03期

7 陸明;陳志強(qiáng);李宇杰;;沙丁胺醇,天使還是魔鬼[J];家庭醫(yī)藥;2012年11期

8 印嘉駿;洛哌丁胺液劑治療兒童急性腹瀉[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2000年03期

9 蘇瑞斌,秦伯益;胍丁胺及其主要生物學(xué)作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2001年02期

10 楊園;張靜;;沙丁胺醇致全身麻木1例[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 肖琳琳;李勁彤;張振清;阮金秀;;胍丁胺三種檢測(cè)方法的比較與應(yīng)用[A];第八次全國(guó)藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

2 李錦;蘇瑞斌;吳寧;李斐;;胍丁胺調(diào)節(jié)阿片功能的分子和神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制[A];全國(guó)第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

3 路新強(qiáng);蘇瑞斌;劉茵;李錦;;胍丁胺調(diào)節(jié)阿片功能的作用部位分析[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)論文摘要集（第二部分）[C];2002年

4 劉福玉;高鈺琪;項(xiàng)德坤;黃慶愿;吳毅;;胍丁胺在抗缺氧性肺動(dòng)脈高壓中的作用[A];第六次全國(guó)缺氧和呼吸病理生理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

5 范理;王彤;田靜;高生;蘇曉鷗;鄭君杰;;固相萃取-GC-MS法測(cè)定飼料中的沙丁胺醇[A];2004年全國(guó)有機(jī)質(zhì)譜學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

6 路新強(qiáng);蘇瑞斌;劉茵;李錦;;胍丁胺調(diào)節(jié)阿片功能的作用部位分析[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

7 潘大津;吳紹長(zhǎng);鄭榮遠(yuǎn);;胍丁胺對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10的的影響[A];2008年浙江省老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨老年醫(yī)學(xué)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班國(guó)際自由基/炎癥與循證醫(yī)學(xué)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

8 蘇瑞斌;盧剛;李錦;秦伯益;;內(nèi)源性胍丁胺對(duì)嗎啡藥理作用的影響[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第八次全國(guó)代表大會(huì)論文摘要集（第一部分）[C];2002年

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1 錢(qián)伯章;叔丁胺國(guó)內(nèi)潛在市場(chǎng)空間大[N];中國(guó)化工報(bào);2006年

2 紫箕;沙丁胺醇供應(yīng)短缺[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

3 魯成;沙丁胺醇怎么用[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

4 胡宜生;沙丁胺醇可致心律失常[N];健康報(bào);2004年

5 郭玉峰;洛哌丁胺服法注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

6 韓詠霞;沙丁胺醇防早產(chǎn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

7 陳列歡;左旋沙丁胺醇可治療兒童急性哮喘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

8 副主任醫(yī)師 韓詠霞;沙丁胺醇平喘首選吸入法[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

9 常怡勇;硫酸鎂吸入有益兒童哮喘治療[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

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1 柴鑒深;胍丁胺在內(nèi)毒素性肺損傷中的治療作用和抗氧化機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 李青;胍丁胺心血管作用的細(xì)胞機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年

3 何洪夏;胍丁胺衍生物的設(shè)計(jì)合成及生物活性研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2006年

4 唐星;茶堿沙丁胺醇復(fù)方緩釋制劑的研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2001年

5 翁謝川;新神經(jīng)遞質(zhì)胍丁胺作用的分子機(jī)制及其新靶點(diǎn)的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

6 宋滇文;胍丁胺對(duì)脊髓繼發(fā)性損害的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

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1 劉珊;班布特羅和沙丁胺醇在人體內(nèi)的立體選擇性藥動(dòng)學(xué)和代謝產(chǎn)物研究[D];華南理工大學(xué);2015年

2 張瑜;肉羊體內(nèi)沙丁胺醇代謝殘留規(guī)律研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 劉政;胍丁胺對(duì)創(chuàng)傷膿毒癥小鼠的生存保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 姚曉燕;沙丁胺醇直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立及其在人群內(nèi)暴露水平檢測(cè)中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2015年

5 楊霞;胍丁胺對(duì)膿毒癥小鼠血管內(nèi)皮的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

6 王明明;沙丁胺醇和多效唑免疫分析方法的基礎(chǔ)研究[D];江蘇大學(xué);2016年

7 張凱;沙丁胺醇在肉牛體內(nèi)代謝殘留規(guī)律研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 鄧佳;胍丁胺對(duì)急性小鼠腹膜炎炎性損傷的保護(hù)效應(yīng)及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 何川;胍丁胺對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠肝功能的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

10 徐鑫淼;糖尿病合并缺血再灌注損傷時(shí)胍丁胺對(duì)血腦屏障通透性的保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2015年

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本文編號(hào)：1268258