本文關鍵詞：維生素D3在煙曲霉呼吸道感染中的作用

  更多相關文章： 煙曲霉 THP-1 巨噬細胞 HBEs 轉(zhuǎn)染 天然免疫 維生素D3

【摘要】：侵襲性肺曲霉病（InvasivePulmonaryAspergillosis，IPA）是免疫缺陷患者死亡的重要原因；氣道上皮細胞（human bronchiolar epitheliar cells，HBEs）及肺巨噬細胞（Alveolar macrophage，AMS）在煙曲霉感染過程中，起著重要的作用。HBEs通過物理屏障及促進纖毛擺動作用促進煙曲霉孢子排出體外，并通過識別曲霉孢子，激活下游免疫反應，從而促進機體對真菌的清除。AMs則能夠利用模式識別受體識別并吞噬曲霉孢子，分泌炎癥相關細胞因子，繼而募集外周血單核細胞及中性粒細胞，啟動下游免疫反應。 近年來維生素D3在免疫反應中的重要作用不斷得到重視。維生素D參與對免疫和炎癥的調(diào)控包括兩個方面：一方面它通過上調(diào)免疫功能參與病原體的清除；另一方面它還能通過促進TH細胞分化，抑制促炎因子分泌等方式誘導免疫耐受，保持免疫穩(wěn)定。本研究擬通過體外實驗的方式，通過建立維生素D3干涉THP-1巨噬細胞/HBEs煙曲霉感染的體外模型，進而研究其在煙曲霉氣道感染中的作用。 第一部分三種不同方法轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞比較 目的：通過腺病毒，慢病毒，脂質(zhì)體2000三種方法分別轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞，探索轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞的最佳方法，為課題組進行維生素D3干涉煙曲霉感染THP-1巨噬細胞相關過程實驗提供前期基礎。 方法：通過腺病毒，慢病毒，脂質(zhì)體2000三種方法分別轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞，熒光顯微鏡觀察細胞轉(zhuǎn)染熒光表達情況，流式細胞儀檢測THP-1細胞轉(zhuǎn)染效率，臺盼藍染色檢測細胞死亡率。 結(jié)果：脂質(zhì)體2000對THP-1巨噬細胞毒性較大，細胞死亡率高，轉(zhuǎn)染效率極低，不適合轉(zhuǎn)染。腺病毒對THP-1巨噬細胞轉(zhuǎn)染效率可在對細胞損傷較小的情況下達較高水平。但是因THP-1巨噬細胞所需的病毒濃度較普通細胞明顯增高，而大劑量病毒轉(zhuǎn)染對細胞免疫狀態(tài)影響大，有很大可能會影響后續(xù)實驗。慢病毒因其病毒產(chǎn)量低，實驗消耗病毒量大，因而影響其應用。 結(jié)論：綜上所述，考慮THP-1巨噬細胞在轉(zhuǎn)染，干涉蛋白表達環(huán)節(jié)存在困難，不適合作為維生素D3干涉煙曲霉感染呼吸道模型的首選細胞。 第二部分維生素D3在氣道上皮細胞煙曲霉感染中的作用 目的：探討在曲霉感染HBEs時，維生素D3發(fā)揮的作用及途徑，及對HBEs免疫狀態(tài)的影響。 方法：1.分別設立空白對照組，腫脹孢子（SC）組、靜息孢子（RC）組，分別感染HBEs，檢測其1-α羥化酶及維生素D受體的表達情況。此外分別于上述實驗組添加維生素D底物25(OH)D3，檢測其維生素D表達情況。 2.分別設立空白對照組，腫脹孢子（SC）組、25(OH)D3組、靜息孢子（RC）+25(OH)D3組，腫脹孢子（SC）+25(OH)D3組、靜息孢子（RC）+25(OH)D3組，煙曲霉感染HBEs后，檢測其模式識別受體Dectin-1、抗菌肽LL-37及促炎因子IL-1β，TNF-α，IL-8的表達情況。 結(jié)果：基礎狀態(tài)下HBEs僅表達微量的1α-羥化酶（CYP27B1）和VDR。A.conidia的刺激使HBEs內(nèi)VDR和CYP27B1表達顯著增加，且腫脹孢子（SC）較靜息孢子（RC）更為明顯。在提供底物25(OH)D3后，曲霉刺激HBEs合成1,25(OH)2D3，且SC較RC效應更明顯。A.conidia的刺激使HBEs對抗菌肽LL-37及促炎因子（IL-1β,TNF-α,IL-8）的轉(zhuǎn)錄，及Dectin-1受體的表達明顯增加。且腫脹孢子（SC）的刺激較靜息孢子（RC）該效應更明顯；加入VD底物顯著增強被A.conidia刺激的HBEs轉(zhuǎn)錄LL-37。但同時卻會顯著抑制對促炎因子（IL-1β,TNF-α,IL-8）的表達，并使Dectin-1的合成顯著減少。 結(jié)論：維生素D3在煙曲霉感染氣道上皮細胞過程中，通過上調(diào)抗菌肽LL-37參與了病原體的清除的同時，通過抑制模式識別受體及促炎因子的表達，起到免疫穩(wěn)定的作用。
【關鍵詞】：煙曲霉 THP-1 巨噬細胞 HBEs 轉(zhuǎn)染 天然免疫 維生素D3
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-11
• 第一部分 三種不同方法轉(zhuǎn)染 THP-1 巨噬細胞比較11-21
• 前言11
• 一、材料和方法11-14
• 二、結(jié)果14-18
• 三、討論18-20
• 四、小結(jié)20-21
• 第二部分 維生素 D3 在氣道上皮細胞煙曲霉感染中的作用21-32
• 前言21-22
• 一、材料和方法22-25
• 二、研究結(jié)果25-28
• 三、討論28-30
• 四、小結(jié)30-32
• 參考文獻32-34
• 文獻綜述34-40
• 參考文獻38-40
• 已撰寫論文40-41
• 致謝41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 主鴻鵠,徐開林;慢病毒載體的改進及其在血液病基因治療中的應用[J];中國實驗血液學雜志;2003年02期

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本文編號：1074265