本文關(guān)鍵詞：miR-21調(diào)控大鼠BMSCs向肌成纖維細(xì)胞分化的機(jī)制研究

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【摘要】：研究報(bào)導(dǎo)放療誘導(dǎo)的纖維萎縮機(jī)制在放射性頜骨壞死中起重要作用,但具體的調(diào)控機(jī)制尚不明確。通過(guò)多種纖維化疾病研究的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)mi R-21與TGF-β1在纖維化過(guò)程中參與調(diào)控作用,因此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的過(guò)程,探討mi R-21是否調(diào)控了TGF-β1對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)分化過(guò)程。此研究有望深入闡述放射性頜骨壞死中頜骨纖維萎縮機(jī)制的具體調(diào)控機(jī)制,為進(jìn)一步治療和預(yù)防提供新靶點(diǎn)。目的:檢測(cè)TGF-β1誘導(dǎo)大鼠BMSCs成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞分化過(guò)程中mi R-21的基因表達(dá),同時(shí)探討mi R-21在體外大鼠BMSCs成纖維細(xì)胞分化過(guò)程中的調(diào)控作用。為治療頜骨纖維化提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。方法:1.原代獲得大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,并進(jìn)行分離純化培養(yǎng)。并用一定濃度的TGF-β1對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化。2.Real-time PCR檢測(cè)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中mi R-21基因表達(dá)水平差異。3.利用mi R-21基因模擬物mimics和inhibitor對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,使其過(guò)表達(dá)或者下調(diào),Real-time PCR和Western blot檢測(cè)肌成纖維細(xì)胞的相關(guān)基因和蛋白α-SMA的表達(dá),觀察mi R-21對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)影響。3.mi R-21基因的mimics模擬物轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞后,加入一定濃度的TGF-β1,Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)肌成纖維細(xì)胞的相關(guān)蛋白α-SMA的表達(dá),從而明確mi R-21對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的調(diào)控作用是否與TGF-β1通路相關(guān)。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一定濃度的TGF-β1可以誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化,在此過(guò)程中mi R-21基因的表達(dá)上調(diào),并且具有時(shí)間依賴性和劑量依賴性。一定濃度的TGF-β1處理后mi R-21表達(dá)升高且在處理后的48h表達(dá)量達(dá)到最高峰值。當(dāng)TGF-β1的濃度為5ng/ml時(shí),mi R-21的表達(dá)最高。人工合成的mi R-21 mimics轉(zhuǎn)染至大鼠BMSCs后能夠有效提高mi R-21表達(dá)量從而促進(jìn)了細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá),而人工合成的mi R-21 inhibitor轉(zhuǎn)染后能夠有效下調(diào)mi R-21表達(dá)量從而降低了細(xì)胞α-SMA基因和蛋白的表達(dá);mi R-21 mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纖維細(xì)胞分化的作用,表明mi R-21為促纖維化的基因。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn),mi R-21能夠正調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化并高表達(dá)α-SMA。本研究為纖維萎縮機(jī)制的基因水平研究提供了初步理論依據(jù),為抗頜骨纖維化的基因治療提出了新的理論。
【關(guān)鍵詞】：頜骨纖維化 骨髓間充質(zhì)細(xì)胞 肌成纖維細(xì)胞 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 miRNA-21
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.55;R739.91
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 縮略語(yǔ)表13-15
• 緒論15-21
• 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀15-19
• 本課題研究基礎(chǔ)19-21
• 第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)及多向分化能力鑒定21-37
• 1 材料與方法21-25
• 2 實(shí)驗(yàn)步驟25-30
• 3 結(jié)果30-33
• 4 討論33-35
• 5 結(jié)論35-37
• 第二部分 外源性TGF-β1 誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞MIR-21表達(dá)的體外研究37-46
• 1 材料與方法37-38
• 2 實(shí)驗(yàn)步驟38-40
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-42
• 4 討論42-45
• 5 結(jié)論45-46
• 第三部分 MIR-21調(diào)控大鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的體外研究46-59
• 1 材料與方法46-47
• 2 實(shí)驗(yàn)步驟47-49
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-55
• 4 討論55-58
• 5 結(jié)論58-59
• 結(jié)束語(yǔ)59-62
• 全文總結(jié)59-60
• 工作創(chuàng)新點(diǎn)60-61
• 進(jìn)一步工作計(jì)劃61-62
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 第一作者文章67-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68-70
• 致謝70-71

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