本文關(guān)鍵詞：熒光標(biāo)記共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建及其在DNA輻射損傷旁效應(yīng)檢測的應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 建立研究電離輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng)DNA損傷的新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停骄喀蒙渚�及低劑量的α粒子輻射產(chǎn)生的旁效應(yīng)DNA雙鏈斷裂（DSBs）和修復(fù)的效應(yīng)特征。 方法： 構(gòu)建定位于在細(xì)胞胞漿中的帶有表達(dá)紅色熒光蛋白標(biāo)簽的pDsRed1-N1-Hspc300重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人皮膚成纖維細(xì)胞（HFS）中，篩選出穩(wěn)定表達(dá)的HFS-RFP-Hspc300細(xì)胞系。將其中一種細(xì)胞進(jìn)行電離輻射（γ射線和低劑量的α粒子），另一種細(xì)胞作為輻射旁效應(yīng)細(xì)胞，把兩種細(xì)胞混合培養(yǎng)，在不同的時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞，利用免疫熒光共聚焦反應(yīng)，觀察鏡下輻照細(xì)胞和旁效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)γH2AX的foci個(gè)數(shù)，從而探究細(xì)胞輻射旁效應(yīng)的DNA損傷和修復(fù)情況（主要是DNA的雙鏈斷裂損傷情況（DSBs））。 結(jié)果： 1．建立了HFS-RFP-Hspc300細(xì)胞和HFS細(xì)胞共培養(yǎng)的細(xì)胞DNA損傷輻射旁效應(yīng)研究實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?2．2Gy60Coγ射線照射細(xì)胞混合后，直接受照射的HFS細(xì)胞與旁效應(yīng)細(xì)胞HFS-RFP細(xì)胞γH2AX的數(shù)目變化情況相似，均在照射后30min出現(xiàn)最大值，隨后慢慢降低，照后各時(shí)間點(diǎn)與對照組比較均有顯著性差異（P0.05）。 3．不同低劑量的α粒子照射，直接受照細(xì)胞HFS-RFP和旁效應(yīng)細(xì)胞HFS中的γH2AX簇集點(diǎn)數(shù)隨時(shí)間變化的趨勢相似，均在照后1h達(dá)到高峰，并且24h時(shí)還是和0h的情況有顯著性差異（P0.05）。輻照細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的比較，在30min、2h、4h，不同劑量間有顯著性差異（P0.05），在1h和8h時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)兩個(gè)γH2AX foci峰值。 結(jié)論： 1．成功構(gòu)建了電離輻射細(xì)胞DNA損傷旁效應(yīng)研究模型。 2．γ射線照射能引起細(xì)胞的旁效應(yīng)，其效應(yīng)與輻照細(xì)胞相同，并慢慢的修復(fù)。 3．低劑量的α粒子照射能誘導(dǎo)旁效應(yīng)DSB損傷與修復(fù)的變化，并且其變化趨勢與相似直接照射的細(xì)胞相似，都能產(chǎn)生二次DSB損傷。
【關(guān)鍵詞】：α粒子輻射 γ射線 旁效應(yīng) 激光共聚焦 DNA損傷修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R818
【目錄】：

• 主要英文縮略語索引5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 第一部分 輻射旁效應(yīng)DNA損傷模型的構(gòu)建15-25
• 1 材料15-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞15
• 1.2 質(zhì)粒與菌株15-16
• 1.3 主要試劑16-17
• 1.4 主要儀器17-18
• 2 方法18-24
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)18
• 2.2 質(zhì)粒構(gòu)建18-22
• 2.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系 HFS-RFP 的構(gòu)建22-23
• 2.4 輻射旁效應(yīng)模型的構(gòu)建23-24
• 3 結(jié)果24-25
• 3.1 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系 HFS-RFP 的鑒定24
• 3.2 細(xì)胞共培養(yǎng)輻射旁效應(yīng)細(xì)胞模型的構(gòu)建24-25
• 第二部分 γ射線誘導(dǎo)的細(xì)胞輻射旁效應(yīng)25-33
• 1 材料25-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞25-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑26
• 1.3 主要儀器26
• 2 方法26-27
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26
• 2.2 細(xì)胞照射26-27
• 2.3 免疫熒光反應(yīng)27
• 2.4 激光共聚焦顯微觀察和結(jié)果分析27
• 2.5 統(tǒng)計(jì)方法27
• 3 結(jié)果27-33
• 3.1 免疫熒光圖片27-29
• 3.2 細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn) γH2AX 的 foci 量29-33
• 第三部分 α粒子照射誘導(dǎo)的細(xì)胞旁效應(yīng)33-40
• 1 材料33
• 1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞33
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑33
• 1.3 實(shí)驗(yàn)器材33
• 2 方法33-35
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)33-34
• 2.2 細(xì)胞照射34
• 2.3 細(xì)胞免疫熒光染色34
• 2.4 激光共聚焦顯微觀察和結(jié)果分析34-35
• 2.5 統(tǒng)計(jì)方法35
• 3 結(jié)果35-40
• 3.1 低劑量α粒子誘發(fā) DNA 雙鏈斷裂（DSB）旁效應(yīng)35-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 綜述51-65
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 碩士期間發(fā)表的論文和參與的科研項(xiàng)目65-66
• 致謝66

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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3 張遵真;DNA氧化損傷修復(fù)基因HOGG1低表達(dá)細(xì)胞株的建立及其應(yīng)用研究[D];四川大學(xué);2005年

4 金言;雷公藤氯內(nèi)酯醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制探討[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

5 徐海娟;廣州大氣顆粒物不同組分遺傳毒性初步研究[D];中國科學(xué)院研究生院（廣州地球化學(xué)研究所）;2007年

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8 張坤;紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞DNA損傷模式研究[D];西北大學(xué);2009年

9 胡迎芬;冬棗黃酮的提取分離及抗氧化、抑瘤活性研究[D];青島大學(xué);2009年

10 陳浙泊;高動態(tài)范圍成像技術(shù)的研究[D];浙江大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬俊;基于LCoS的HDR實(shí)時(shí)圖像獲取系統(tǒng)研究[D];浙江大學(xué);2011年

2 朱良銷;高動態(tài)范圍成像系統(tǒng)的研究[D];電子科技大學(xué);2011年

3 陸慧賢;水環(huán)境鎘對縊蟶毒理學(xué)效應(yīng)的研究[D];寧波大學(xué);2011年

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6 劉淼;UV介導(dǎo)的細(xì)胞DNA損傷及損傷后修復(fù)的初步研究[D];陜西師范大學(xué);2006年

7 王淑瑞;磁場結(jié)合抗腫瘤藥物對腫瘤生物效應(yīng)的初步研究[D];陜西師范大學(xué);2006年

8 姜薇;北京城區(qū)大氣可吸入顆粒物對肺細(xì)胞的損傷作用及其機(jī)制的研究[D];首都師范大學(xué);2007年

9 陳波;GSM 1800 MHz射頻電磁場對小鼠胚胎干細(xì)胞DNA損傷的影響[D];浙江大學(xué);2007年

10 蔣磊;UV-B誘導(dǎo)植物DNA損傷和紫外吸收化合物形成的研究[D];華南師范大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：熒光標(biāo)記共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建及其在DNA輻射損傷旁效應(yīng)檢測的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：430359