本文關(guān)鍵詞：自噬通過(guò)Stat3信號(hào)通路降低骨髓血細(xì)胞DNA的輻射損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究細(xì)胞自噬對(duì)輻射所致DNA損傷的修復(fù)作用及其作用機(jī)制方法:1、采用流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦熒光顯微鏡技術(shù)檢測(cè)小鼠全骨髓單個(gè)核細(xì)胞中帶熒光標(biāo)記γ-H2AX蛋白的表達(dá)情況。2、采用堿性或中性的單細(xì)胞彗星電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中DNA雙鏈斷裂情況。3、應(yīng)用免疫印跡方法檢測(cè)雷帕霉素(Rapamycin,Rap)處理后細(xì)胞中Stat3、自噬相關(guān)蛋白。4、應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)慢病毒侵染后細(xì)胞中Stat3的m RNA水平。5、應(yīng)用成像流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)處理后細(xì)胞的p-Stat3(Y705)在細(xì)胞核中的定位情況。結(jié)果:1、雷帕霉素對(duì)骨髓血細(xì)胞DNA雙鏈的斷裂有輻射保護(hù)作用。無(wú)論在體內(nèi)還是體外,雷帕霉素處理組的骨髓單個(gè)核細(xì)胞輻照后產(chǎn)生的γ-H2AX都比單獨(dú)輻照組明顯降低。單細(xì)胞堿性彗星電泳實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)雷帕霉素處理組的細(xì)胞的彗星尾距也明顯地降低(為p0.05),而能表征DNA雙鏈斷裂(DSB)的中性彗星電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),雷帕霉素處理輻照組比單獨(dú)輻照組所產(chǎn)生的DSB減少(p0.05)。2、雷帕霉素通過(guò)激活自噬實(shí)現(xiàn)DNA雙鏈斷裂損傷的輻射保護(hù)作用。蛋白印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn),雷帕霉素預(yù)處理后單個(gè)核細(xì)胞的自噬水平升高。用Baf A1抑制自噬后,雷帕霉素介導(dǎo)的輻照保護(hù)作用明顯被抑制。運(yùn)用造血系統(tǒng)特異性敲除Atg7的小鼠模型研究發(fā)現(xiàn),在自噬缺失時(shí),雷帕霉素介導(dǎo)的DSB損傷修復(fù)的作用受到抑制。3、在對(duì)骨髓單個(gè)核細(xì)胞的輻照保護(hù)作用中,Stat3的活性受到自噬調(diào)控。雷帕霉素預(yù)處理可以激活Stat3通路,抑制自噬或自噬缺陷都能明顯抑制Stat3的激活。4、自噬對(duì)骨髓血細(xì)胞DNA的輻射保護(hù)作用依賴于Stat3。通過(guò)藥物抑制Stat3的活化或用sh RNA干擾Stat3的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Stat3活性受到抑制時(shí),自噬介導(dǎo)的輻照保護(hù)作用受到削弱。結(jié)論:雷帕霉素預(yù)處理能降低輻照導(dǎo)致的骨髓細(xì)胞DNA雙鏈斷裂的DNA損傷,這種作用是通過(guò)自噬所介導(dǎo)的,自噬通過(guò)調(diào)控Stat3信號(hào)通路的活化參與DNA雙鏈斷裂的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：雷帕霉素 自噬 DNA雙鏈斷裂損傷 Stat3 輻照
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R818
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-18
• 一、材料11-13
• 1、小鼠11
• 2、細(xì)胞11
• 3、主要試劑11-12
• 4、主要儀器12-13
• 二、方法13-18
• 1、細(xì)胞培養(yǎng)13
• 2、流式細(xì)胞術(shù)13
• 3、免疫熒光染色13-14
• 4、單細(xì)胞彗星電泳實(shí)驗(yàn)14
• 5、蛋白質(zhì)免疫印跡14-15
• 6、實(shí)時(shí)定量PCR15-17
• 7、慢病毒的包裝和侵染17-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-27
• 一、雷帕霉素對(duì)骨髓血細(xì)胞DNA雙鏈的斷裂有輻射保護(hù)作用18-20
• 二、雷帕霉素通過(guò)激活自噬實(shí)現(xiàn)DNA雙鏈斷裂損傷的輻射保護(hù)作用20-22
• 三、STAT3 在自噬介導(dǎo)的輻照保護(hù)中受自噬調(diào)控22-24
• 四、自噬對(duì)骨髓血細(xì)胞DNA的輻射保護(hù)作用依賴于STAT324-27
• 討論27-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 綜述31-44
• 一、細(xì)胞自噬在細(xì)胞中作用31-32
• 二、細(xì)胞自噬在基因組穩(wěn)定性的作用32-33
• 三、細(xì)胞自噬在DNA損傷修復(fù)中的角色33-34
• 四、自噬在輻射保護(hù)中的研究進(jìn)展34-35
• 五、STAT3 與細(xì)胞自噬的關(guān)系35-36
• 六、STAT3 與DNA損傷修復(fù)的研究進(jìn)展36-37
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 附錄44-45
• 中英文縮略詞匯表45-47
• 致謝47-48

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  本文關(guān)鍵詞：自噬通過(guò)Stat3信號(hào)通路降低骨髓血細(xì)胞DNA的輻射損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：326671