本文關(guān)鍵詞：自噬通過Stat3信號通路降低骨髓血細胞DNA的輻射損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究細胞自噬對輻射所致DNA損傷的修復作用及其作用機制方法:1、采用流式細胞術(shù)和激光共聚焦熒光顯微鏡技術(shù)檢測小鼠全骨髓單個核細胞中帶熒光標記γ-H2AX蛋白的表達情況。2、采用堿性或中性的單細胞彗星電泳實驗檢測細胞中DNA雙鏈斷裂情況。3、應用免疫印跡方法檢測雷帕霉素(Rapamycin,Rap)處理后細胞中Stat3、自噬相關(guān)蛋白。4、應用熒光定量PCR檢測慢病毒侵染后細胞中Stat3的m RNA水平。5、應用成像流式細胞術(shù)檢測處理后細胞的p-Stat3(Y705)在細胞核中的定位情況。結(jié)果:1、雷帕霉素對骨髓血細胞DNA雙鏈的斷裂有輻射保護作用。無論在體內(nèi)還是體外,雷帕霉素處理組的骨髓單個核細胞輻照后產(chǎn)生的γ-H2AX都比單獨輻照組明顯降低。單細胞堿性彗星電泳實驗所檢測雷帕霉素處理組的細胞的彗星尾距也明顯地降低(為p0.05),而能表征DNA雙鏈斷裂(DSB)的中性彗星電泳實驗檢測發(fā)現(xiàn),雷帕霉素處理輻照組比單獨輻照組所產(chǎn)生的DSB減少(p0.05)。2、雷帕霉素通過激活自噬實現(xiàn)DNA雙鏈斷裂損傷的輻射保護作用。蛋白印跡檢測發(fā)現(xiàn),雷帕霉素預處理后單個核細胞的自噬水平升高。用Baf A1抑制自噬后,雷帕霉素介導的輻照保護作用明顯被抑制。運用造血系統(tǒng)特異性敲除Atg7的小鼠模型研究發(fā)現(xiàn),在自噬缺失時,雷帕霉素介導的DSB損傷修復的作用受到抑制。3、在對骨髓單個核細胞的輻照保護作用中,Stat3的活性受到自噬調(diào)控。雷帕霉素預處理可以激活Stat3通路,抑制自噬或自噬缺陷都能明顯抑制Stat3的激活。4、自噬對骨髓血細胞DNA的輻射保護作用依賴于Stat3。通過藥物抑制Stat3的活化或用sh RNA干擾Stat3的表達,發(fā)現(xiàn)Stat3活性受到抑制時,自噬介導的輻照保護作用受到削弱。結(jié)論:雷帕霉素預處理能降低輻照導致的骨髓細胞DNA雙鏈斷裂的DNA損傷,這種作用是通過自噬所介導的,自噬通過調(diào)控Stat3信號通路的活化參與DNA雙鏈斷裂的修復。
【關(guān)鍵詞】：雷帕霉素 自噬 DNA雙鏈斷裂損傷 Stat3 輻照
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R818
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-18
• 一、材料11-13
• 1、小鼠11
• 2、細胞11
• 3、主要試劑11-12
• 4、主要儀器12-13
• 二、方法13-18
• 1、細胞培養(yǎng)13
• 2、流式細胞術(shù)13
• 3、免疫熒光染色13-14
• 4、單細胞彗星電泳實驗14
• 5、蛋白質(zhì)免疫印跡14-15
• 6、實時定量PCR15-17
• 7、慢病毒的包裝和侵染17-18
• 實驗結(jié)果18-27
• 一、雷帕霉素對骨髓血細胞DNA雙鏈的斷裂有輻射保護作用18-20
• 二、雷帕霉素通過激活自噬實現(xiàn)DNA雙鏈斷裂損傷的輻射保護作用20-22
• 三、STAT3 在自噬介導的輻照保護中受自噬調(diào)控22-24
• 四、自噬對骨髓血細胞DNA的輻射保護作用依賴于STAT324-27
• 討論27-29
• 參考文獻29-31
• 綜述31-44
• 一、細胞自噬在細胞中作用31-32
• 二、細胞自噬在基因組穩(wěn)定性的作用32-33
• 三、細胞自噬在DNA損傷修復中的角色33-34
• 四、自噬在輻射保護中的研究進展34-35
• 五、STAT3 與細胞自噬的關(guān)系35-36
• 六、STAT3 與DNA損傷修復的研究進展36-37
• 參考文獻37-44
• 附錄44-45
• 中英文縮略詞匯表45-47
• 致謝47-48

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