目的：通過(guò)觀察早期磁共振彌散加權(quán)成像（diffusion weighted imaging，DWI）圖像及表觀彌散系數(shù)（Apparent Diffuse Coefficient，ADC）圖像的影像特點(diǎn)并監(jiān)測(cè)ADC值的變化規(guī)律，從而探討水通道蛋白-4（Aquaporin-4，AQP4）基因沉寂對(duì)新生豬缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）的干預(yù)效果，進(jìn)而研究早期缺氧缺血性腦損傷AQP4mRNA表達(dá)的變化及意義。 材料與方法：新生健康清潔級(jí)約克種豬40只（日齡3-5天，體重1.3-1.6kg，雌雄不限，由大連華僑種豬場(chǎng)提供）隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組（每組20只）。其中12只種豬（實(shí)驗(yàn)組5只及對(duì)照組7只）在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于缺氧、手術(shù)創(chuàng)傷等原因死亡，實(shí)驗(yàn)組中2例因注射藥物失敗列入對(duì)照組，最終實(shí)驗(yàn)組13例、對(duì)照組15例。實(shí)驗(yàn)組給予腦室注射siRNA-AQP4（AQP4干擾序列）+缺氧缺血（雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久結(jié)扎+4%低氧通氣30min），對(duì)照組給予siRNA-Negative（AQP4非干擾序列）+缺氧缺血。術(shù)后給予青霉素肌肉注射預(yù)防感染。兩組種豬均根據(jù)具體情況酌情喂養(yǎng)，以保證充足的熱量及液體供給。 模型制備結(jié)束后，采用1.5T MR掃描儀掃描，使用標(biāo)準(zhǔn)頭線圈，冠狀位掃描。分別在缺氧缺血后0h、1h、3h、6h、9h及12h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行MR掃描；掃描序列包括T1加權(quán)像(T1WI)、T2加權(quán)像（T2WI）、FLAIR及DWI。其中DWI掃描參數(shù)如下：TR6000ms，TE91.1ms，層厚4mm，2次采集，矩陣128×128，b值分別為0/1000s/mm2。將采集后的原始圖像傳送至GE advantage workstation AW4.4工作站上進(jìn)行后處理，分別于雙側(cè)大腦半球額葉皮層、腦室旁及海馬區(qū)域選擇感興趣區(qū)(Regions of interest，ROI)，測(cè)量并得到ADC值。 所有時(shí)間點(diǎn)掃描結(jié)束后給予3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后斷頭取腦。一側(cè)腦組織進(jìn)行SP免疫組織化學(xué)染色，光鏡下觀察病理改變；另一側(cè)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)，觀察腦組織中目的基因的表達(dá)情況，檢測(cè)待測(cè)樣品的Ct值。 應(yīng)用社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件包（statistics package for social science，SPSS）16.0版進(jìn)行數(shù)據(jù)分析：對(duì)兩組間不同部位及不同時(shí)間點(diǎn)的ADC值進(jìn)行重復(fù)測(cè)量方差分析方法進(jìn)行檢驗(yàn)；對(duì)兩組間相同部位AQP4mRNA相對(duì)表達(dá)量及Ct值進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)；對(duì)兩組的不同部位間AQP4mRNA相對(duì)表達(dá)量及Ct值進(jìn)行配對(duì)樣本T檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1．實(shí)驗(yàn)組大腦額葉皮層、海馬區(qū)及側(cè)腦室旁區(qū)域未見(jiàn)明顯高信號(hào)，且各時(shí)間點(diǎn)ADC值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p0.05）；對(duì)照組各區(qū)域出現(xiàn)不同程度高信號(hào)，相應(yīng)的ADC值均不同程度的減低，表現(xiàn)為：1小時(shí)內(nèi)下降明顯，3小時(shí)最低，6小時(shí)開(kāi)始回升，12小時(shí)接近正常，且各時(shí)間點(diǎn)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。同一區(qū)域?qū)φ战M各時(shí)間點(diǎn)ADC值較相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組均減低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0.05）。 2．獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)結(jié)果顯示：兩組間海馬區(qū)AQP4mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯不同，實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組（相對(duì)表達(dá)量=0.80，1.48），且兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.04）；實(shí)驗(yàn)組腦室旁區(qū)AQP4mRNA相對(duì)表達(dá)量同樣低于對(duì)照組（相對(duì)表達(dá)量=0.69，1.10），但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.31）。實(shí)驗(yàn)組海馬區(qū)及側(cè)腦室旁區(qū)Ct值較對(duì)照組均增高（海馬區(qū)=20.62，18.47；側(cè)腦室旁區(qū)=20.53，18.93），但這些差別缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.05，0.92）。 3．配對(duì)樣本T檢驗(yàn)結(jié)果顯示：海馬區(qū)相對(duì)表達(dá)量明顯高于側(cè)腦室旁白質(zhì)區(qū)域（均差=0.25），且兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.00）；海馬區(qū)Ct值較腦室旁白質(zhì)區(qū)域減低（均差=-0.21），但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.09）。 結(jié)論： 1．新生豬HIE模型可操作性好。雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎+4%低氧通氣30min可以造成程度較為一致的HIE，為研究新生兒HIE提供較為可靠的動(dòng)物模型。 2．DWI在診斷早期缺氧缺血性腦水腫并揭示其微觀病理生理學(xué)的演變規(guī)律有明顯的優(yōu)勢(shì)。ADC值從病理生理水平反映了早期缺氧缺血性腦水腫的變化規(guī)律。 3．AQP4的表達(dá)與HIBD腦水腫病理變化的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在缺氧缺血性腦水腫早期干預(yù)AQP4基因可以預(yù)防腦水腫的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R445.2;R450
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2889460