背景: 超聲微泡介導(dǎo)的超聲分子顯像及藥物和基因靶向傳輸由于微泡受循環(huán)中血液軸流所產(chǎn)生剪切力的影響,效率低下,尤其是在動(dòng)脈中。超聲微泡造影劑在血管腔中的軸流阻礙了微泡與血管內(nèi)皮的結(jié)合,而這個(gè)缺點(diǎn)可用超聲輻射力克服。 目標(biāo): 本研究用低能量超聲分別通過體外實(shí)驗(yàn)觀察不同參數(shù)的超聲輻射力對(duì)微泡造影劑的推移聚集作用,以及在體檢測輻射力促進(jìn)靶向微泡尋靶的能力,目的是為超聲分子顯像及藥物的傳遞篩選適宜的輻射力參數(shù)。 方法: 1.不同參數(shù)的超聲輻射力對(duì)微泡造影劑的作用 建立微血管流體模型,通過體視顯微鏡觀察并記錄不同的輻照參數(shù)對(duì)微泡造影劑的推移、聚集現(xiàn)象,研究不同的超聲輻射力參數(shù)(聲壓、頻率、微泡濃度、超聲輻照時(shí)間)對(duì)流動(dòng)狀態(tài)下的微泡造影劑的推移聚集作用。 2.超聲輻射力促微泡造影劑在小血管內(nèi)的靶向黏附作用 靜電吸附法制備攜抗ICAM-1抗體的靶向微泡造影劑,并對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià),昆明小鼠陰囊內(nèi)注射TNF-α構(gòu)建小鼠提睪肌微血管炎癥模型,并隨機(jī)的分為三組進(jìn)行實(shí)驗(yàn):①靶向微泡+0KPa輻射力組(對(duì)照);②靶向微泡+54.2KPa輻射力組;③靶向微泡+79.3KPa輻射力組,每組5個(gè)只。通過激光共聚焦顯微鏡觀察小鼠提睪肌微血管內(nèi)綠色熒光的面積,以此驗(yàn)證超聲輻射力促ICAM-1靶向微泡的在體尋靶能力. 3.超聲輻射力促微泡造影劑在大血管內(nèi)的靶向黏附 親和素橋接法制備攜CD34抗體的靶向微泡造影劑,并分析鑒定。為了進(jìn)一步證實(shí)輻射力在大血管中的作用,本實(shí)驗(yàn)以正常大鼠腹主動(dòng)脈為觀察對(duì)象,9只SD大鼠隨機(jī)的分為三組:①靶向微泡+0KPa輻射力組(對(duì)照組);②靶向微泡+54.2KPa輻射力組;③靶向微泡+79.3KPa輻射力組。經(jīng)大鼠尾靜脈團(tuán)注攜CD34抗體靶向造影劑的同時(shí)進(jìn)行超聲輻照。 掃描電鏡觀察并記錄大鼠腹主動(dòng)脈后壁內(nèi)皮表面粘附的微泡情況,利用視覺模糊評(píng)分法量化微泡粘附數(shù)量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果: 1.離體實(shí)驗(yàn) 當(dāng)聲強(qiáng)等參數(shù)一定時(shí),頻率為2.0 MHz的超聲波對(duì)微泡的推移作用大于1.0 MHz和0.5 MHz,且聚集作用在2.0 MHz時(shí)最明顯;低聲壓超聲對(duì)微泡無明顯破壞作用,但使其流速減慢;微泡濃度為7×10~7個(gè)/ml和7×10~5個(gè)/ml時(shí)超聲輻射力對(duì)微泡有明顯推移聚集作用,但微泡濃度高達(dá)7×109個(gè)/ml時(shí),超聲輻射力對(duì)微泡的作用不明顯;延長輻照時(shí)間對(duì)微泡的推移和聚集作用無明顯影響。 2.小鼠提睪肌微血管在體實(shí)驗(yàn) 成功制備攜抗ICAM-1抗體的靶向微泡造影劑,濃度為10~7 /ml,粒徑范圍為1-10μm,90%在3.25μm以下,抗體攜帶率75%左右。對(duì)照組提睪肌微血管內(nèi)平均熒光為78.0±35.8μm~2,累積光密度為2342.7±1053.1。54.2KPa輻射力組和73.9KPa輻射力組提睪肌微血管內(nèi)平均熒光面積為422.8±91.3μm~2和1522.0±464.2μm~2,累積光密度為9618.9±2522.0和42123.1±20001.4。單因素方差分析結(jié)果顯示三組組間比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,73.9KPa輻射力組的熒光面積約為對(duì)照組的17.5倍,累積光密度約為對(duì)照組20倍的。 3.大鼠腹主動(dòng)脈在體實(shí)驗(yàn) 成功制備攜CD34抗體的靶向微泡造影劑,濃度為10~7 /ml,粒徑范圍為1-8μm,90%在2.96μm以下,抗體攜帶率為70%左右。對(duì)照組平均視覺評(píng)分為:0.467±0.507分;54.2KPa輻射力組平均視覺評(píng)分為1.067±0.785分;73.9KPa輻射力組血管內(nèi)皮表面可見大量成團(tuán)的微泡附著,平均視覺評(píng)分為3.367±1.189分,單因素方差分析結(jié)果顯示三組組間比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論: 1.不同參數(shù)的超聲輻射力對(duì)微泡造影劑的推移和聚集作用不同,可望通過調(diào)整輻射力參數(shù)來最大程度上提高超聲微泡造影劑在血液循環(huán)中的靶向粘附作用。2.超聲輻射力能提高了靶向微泡在微血管內(nèi)對(duì)血管壁靶點(diǎn)的黏附,尤其是當(dāng)輻射力聲壓為73.9KPa時(shí)靶向粘附率顯著提高。3.超聲輻射力更能在大血管中發(fā)揮其優(yōu)勢對(duì)抗高速血流所產(chǎn)生的剪切力,促進(jìn)微泡的靶向粘附,當(dāng)輻射力聲壓為73.9KPa時(shí)血管內(nèi)皮表面能觀察到大量微泡的聚集粘附。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R445.1
【部分圖文】：

圖 1 微血管流體模型示意圖(二) 分組及評(píng)判方法以聲壓、頻率、微泡濃度、超聲輻照時(shí)間為考察因素，根據(jù)析因設(shè)計(jì)的方差分行不同的組合分組(表 1)，即當(dāng)考察某一因素個(gè)水平間的差別時(shí)其他因素須保持固變，每組重復(fù)實(shí)驗(yàn) 3 次。觀察不同參數(shù)輻照時(shí)微泡與管壁的距離，微泡的聚集的速變化，分析各因素對(duì)微泡造影劑的作用。表 1 實(shí)驗(yàn)所考察的因素及分組考察因素頻率(MHz)輸出功率(W)微泡濃度(個(gè)/ml)輻照時(shí)間(s)0.5 0.34 7×10511.0 0.68 7×10732.0 1.02 7×1095

在 3.25μm 以下(圖 2)。攜帶 ICAM-1 抗體的微泡在 400 倍熒光顯微鏡下，表面發(fā)出環(huán)形綠色熒光(照片 9)。熒光抗體攜帶率約為 75%左右(圖 3.1,3.2)。在小鼠提睪肌微血管炎癥模型輻射力促微泡靶向粘附實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組提睪肌微血管內(nèi)幾乎無或者僅見少許微弱的綠色熒光(照片 10)，平均熒光面積為 78.0±35.8μm2, 累積光密度為 2342.7±1053.1(見表 2)；54.2KPa 輻照組部分提睪肌微血管內(nèi)可見短條狀綠色熒光(照片 11)，平均熒光面積為 422.8±91.3μm2, 累積光密度為 9618.9±2522.0(見表 2)；73.9KPa 輻照組提睪肌微血管內(nèi)可見較多的呈分支長條狀綠色熒光(照片 12), 平均熒光面積為1522.0±464.2μm2, 累積光密度為 42123.1±20001.4(見表 2)。多重組間對(duì)比得出三組提睪肌血管內(nèi)熒光面積及累積光密度均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表 2)，73.9KPa 輻射力組的平均熒光面積明顯高于對(duì)照組，約是對(duì)照組的 17.5 倍(圖 4)，而累積光密度約是對(duì)照組的 20 倍(圖 5)。

圖 3.1 普通微泡流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度及攜帶率圖 3.2 攜 ICAM-1-FITC 抗體靶向微泡流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度及攜帶率表 2 各組微血管內(nèi)熒光面積的統(tǒng)計(jì)學(xué)資料

【引證文獻(xiàn)】

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1 王朝清;馬方;劉波;;超聲微泡連接特異性抗體的制備方法及靶向化處理因素對(duì)超聲微泡物理性質(zhì)的影響[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2012年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王朝清;微血管損傷的靶向超聲造影劑制備及其黏附效能的實(shí)驗(yàn)研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2012年

本文編號(hào)：2812337