發(fā)布時間：2020-09-03 21:01

　　 目的 探討水通道蛋白-4(AQP4)在早期缺血性腦水腫過程中的表達規(guī)律。 方法 將40只Wistar大鼠，隨機分為3組，即對照組4只、假手術(shù)組12只和手術(shù)組(大腦中動脈栓塞—MCAO)24只。將后2組再進一步分為6小組(每小組各2只和4只)，在術(shù)后15 min、30 min、1 h、3 h、6 h及24 h等時間點，分別采用免疫組化(△S)、原位雜交(α)和圖像分析技術(shù)測定梗塞區(qū)AQP4的表達水平，同時用光鏡和透射電鏡(TEM)進行對應(yīng)部位的病理觀察。對照組不手術(shù)；假手術(shù)組不栓塞，其余操作同手術(shù)組。 結(jié)果 AQP4基因和蛋白變化具有一致性(r=0.949)。對照組與假手術(shù)組比較無顯著性差異(t=1.67，P0.05)。手術(shù)組與對照組比較有顯著性差異(t=16.8，P0.01)。AQP4表達豐富的部位在脈絡(luò)叢、室管膜細胞、垂體、海馬和梗塞區(qū)周的膠質(zhì)細胞。在24 h內(nèi)，AQP4表達出現(xiàn)2個高峰和中間平臺期。在15 min～1 h， AQP4表達明顯增強，呈線性增加。病理顯示此期主要為細胞內(nèi)水腫。隨著時間推移(即1 h～6 h)，AQP4表達出現(xiàn)相對平臺期，對應(yīng)的病理改變?yōu)檠茉葱运[。 WP=14 6 h后，AQP4表達又呈現(xiàn)第二個高峰期，病理變化主要是組織壞死。 結(jié)論 早期缺血性腦組織經(jīng)歷了從細胞內(nèi)水腫，發(fā)展到血管源性水腫，最終出現(xiàn)組織壞死的病理過程。AQP4表達增強與細胞內(nèi)水腫和梗死密切相關(guān)，尤其可能是形成超早期腦缺血性細胞內(nèi)水腫的重要因素之一，AQP4表達與血管源性水腫無明顯關(guān)系。 關(guān)鍵詞 腦水腫;腦缺血;動物;實驗;病理學(xué);水通道蛋白-4
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R445.2
【部分圖文】：

線圖 1 ICA: 頸內(nèi)動脈; ECA: 頸外動脈; PComA: 大腦后動脈; MCA: 大腦中動脈表 1-2 每小組大鼠在指標(biāo)觀察中的分配情況(只)Tab 1-2 Distribution and number of the rats in the experiment of the observed itemitemgroupHistologicexamination(HE,TEM)Molecularbiologicexamination(IC,ISH)controlpseudo-operationoperation211213五、病理觀察石蠟包埋，切片厚 6μm，常規(guī) HE 染色，光鏡下觀察并顯微照像。常規(guī)透電鏡標(biāo)本制備，鉛鈾雙染色，在 EX-2000 型透射電鏡下觀察并照像。

TE 92.3 ms。T1WI：TR 300ms，TE 9ms。。參考劉梅麗等[4]方法，將 DWI 上呈高信號，而信號的腦組織定義為影像半暗帶；將在 DWI 和 梗死區(qū)。以年輪狀方式由外向內(nèi)測定上述 2 個區(qū))(如圖 3-1)。依據(jù)公式：ADC =In(S1/S0)/(bo-b1)， b=0 的信號強度，In為自然對數(shù)，ADCR =(患側(cè) 。按照公式 rs =(梗塞區(qū)面積/同側(cè)半球總面積)×1信號最大層面的相對面積(rs-DWI，rs-T2WI)。以后，用 1％的戊巴比妥納過量麻醉動物，用經(jīng) D聚甲醛和 1%氯化三苯四氮唑(TTC)混合液經(jīng)心灌影像半暗帶組織對應(yīng)切片進行病理及分子生物學(xué)實

三、通道蛋白在腦的分布與功能在哺乳動物組織中已鑒定出十種水通道蛋白，統(tǒng)稱 Aquaporin(AQP)。不同水通道蛋白 cDNA 有高度同源性。水通道蛋白的主要功能是轉(zhuǎn)運水。根據(jù) AQP 對水和其它溶質(zhì)的通透性，Ishibashi[15]將 AQP 家族分為兩個亞族：AQP0、AQP1、AQP2、AQP04、AQP5、 AQP6、AQP8 為一亞族，AQP3、AQP7、AQP9 屬于另一亞族。前者為高度選擇性水通透性，即除水之外不轉(zhuǎn)運其它小分子溶質(zhì)；而后線圖 1 水通道蛋白在細胞膜上的解剖結(jié)構(gòu)圖中 A、C 和 E 襻位于細胞膜外，B 和 D 襻以及N-和 C-末端在細胞膜內(nèi)。兩個括號代表重復(fù)序列。NPA 表示天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸三個保守氨基酸。G94 和 C189 分別代表該位置上的甘氨酸和半胱氨酸。(引自 Preston GM, Agre P. Isolation of thecDNA for erythrocyte integral membrane protein of28 kilodaltons: member of an ancient channel family.Proc Natl Acad Sci USA, 1991,88:11110-11114)線圖 2 水通道蛋白的晶體結(jié)構(gòu)圖中標(biāo)尺為 1nm(10 )。數(shù)字 1~6 為高電子密度區(qū),代表水通道的跨膜區(qū)段。圖中顯示 AQP1 的四聚體結(jié)構(gòu)，中央代表水通道小孔的入口。(引自 Mitra AK,van Hoek AN, Wiener M, et al. The CHIP 28 waterchannel visualized in ice by electron cryst-allography.Nature Struct Biol, 1995, 2(9):726-729)

【參考文獻】

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本文編號：2811952