【摘要】：目的:1、制備包載經聚乙二醇(PEG)修飾的rAd-EGFP-HIF-1a重組腺病毒的乳酸/羥基乙酸共聚物(Polylactic-co-glycolic acid,PLGA)超聲造影劑。2、檢測該PLGA超聲造影劑的物理性質、體外釋放病毒規(guī)律、體外釋放病毒轉染效率及其產生的免疫反應程度。 方法:1、重組腺病毒的PEG修飾,制得PEG-Adv。2、采用雙乳化法制備載PEG-Adv和載Adv的PLGA超聲造影劑。3、采用掃描電子顯微鏡觀察該兩種超聲造影劑的表面形態(tài);使用Malvern激光粒徑測量儀檢測該造影劑粒徑分布頻率及均值;紫外分光光度計測定其包封率及體外釋放病毒規(guī)律;用ELISA法檢測其產生的免疫反應程度。 結果:1、按每個病毒顆粒衣殼蛋白質含7500個賴氨酸殘基計算活化的甲氧基聚乙二醇(mPEG-SPA)用量,mPEG-SPA與Lys為1:1摩爾比加入相應量得mPEG-SPA,制得PEG-SPA。2、載PEG-Adv的PLGA和載Adv的PLGA分布均勻,形態(tài)相似,平均粒徑分別為6.23±1.2μm、6.19±1.0μm;包封率分別為17.23%、14.35%;PEG-Adv和單純Adv從PLGA釋放規(guī)律相似,但從PLGA釋放出來的PEG-Adv的轉染效率比從PLGA釋放出來的單純Adv要高;包載PEG-Adv的PLGA產生的免疫反應強度也較低。 結論:用PLGA超聲造影劑包載PEG化的重組腺病毒rAd-EGFP/ HIF-1α,可改善Adv在體內安全性差的缺點,釋放出來的病毒穩(wěn)定性好,轉染效率較高,其作為心血管疾病的基因治療載體具有較好的研究前景。 第二部分結合單克隆抗體的靶向包載經PEG修飾的重組腺病毒PLGA造影劑的制備及其體外尋靶實驗 目的:采用共價結合的方法制備靶向包載經PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH造影劑,并考察其體外尋靶能力。 方法:采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺]作為偶聯(lián)活性劑,以碳二亞胺法將包載經PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH造影劑表面上的羧基與抗人E-seletin單克隆抗體上的氨基共價結合,制備靶向高分子超聲造影劑;采用光學顯微鏡觀察該靶向PLGA-COOH造影劑與人臍靜脈血管內皮細胞在體外的尋靶結合能力。 結果:體外尋靶實驗顯示,該靶向包載經PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH超聲造影劑能聚集并牢固結合到人臍靜脈血管內皮細胞表面。 結論:采用碳二亞胺法,通過共價結合的方法,成功制備出靶向包載經PEG修飾的重組腺病毒PLGA-COOH造影劑,該靶向造影劑在體外具有較強的特異性尋靶結合能力。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R445.1
【圖文】：

29圖1-1-4 載PEG-Adv重組腺病毒的PLGA-COOH超聲造影劑平均粒徑分布圖，平均粒徑約6.23μmFig.1-1-4 Diameter distribution of PEGylated recombinant Adv for microencapsulation withinPLGA-COOH ultrasound contrast agents，the mean diameter was 6.23μm圖1-1-5 載PEG-Adv重組腺病毒的PLGA-COOH超聲造影劑光鏡照片(×400)Fig.1-1-5 Light microscope image of PEGylated recombinant Adv for microencapsulationwithin PLGA-COOH ultrasound contrast agents(×400)

Fig.1-1-4 Diameter distribution of PEGylated recombinant Adv for microencapsulation withinPLGA-COOH ultrasound contrast agents，the mean diameter was 6.23μm圖1-1-5 載PEG-Adv重組腺病毒的PLGA-COOH超聲造影劑光鏡照片(×400)Fig.1-1-5 Light microscope image of PEGylated recombinant Adv for microencapsulationwithin PLGA-COOH ultrasound contrast agents(×400)

-7b加入載Adv的

【參考文獻】

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本文編號：2753704