發(fā)布時(shí)間：2020-07-05 21:43

【摘要】：第一部分HER2靶向相變型高分子超聲造影劑的制備及其特性研究 目的制備一種新型相變型血管外靶向超聲造影劑——包裹液態(tài)氟碳的HER2靶向高分子納米球，并考察其理化性質(zhì)、相變能力及顯影效果。1 方法首先采用單乳化法制備包裹液態(tài)氟碳(PFH)的高分子PLGA納米球(PFH-PLGA)，然后通過碳二亞胺化學(xué)連接法將靶向HER2的特異性抗體曲妥珠單克隆抗體（trastuzumab）連接到納米球表面，制備成靶向納米球（PFH-PLGA-tra）；檢測(cè)其形態(tài)、粒徑、表面電位等一般性質(zhì)；免疫熒光法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)trastuzumab與納米球連接情況；體外加熱法考察所包裹液態(tài)氟碳的相變情況；體外凝膠模型觀察納米球增強(qiáng)超聲顯影效果。 結(jié)果靶向液態(tài)氟碳造影劑光鏡下呈球形，形態(tài)規(guī)則，大小均一，平均粒徑為(261±28)nm，平均表面電位為(-2.92±0.83) mv；免疫熒光法顯示，trastuzumab被成功地連接到了納米球上，流式細(xì)胞術(shù)顯示靶向造影劑抗體連接率高達(dá)98.07％；體外熱相變實(shí)驗(yàn)示，較多納米球發(fā)生了液氣相變，成為粒徑較大的微泡；體外凝膠顯影實(shí)驗(yàn)示，靶向造影劑在高溫中（80攝氏度）的回聲灰階值較室溫中的灰階值明顯增強(qiáng)(P0.05)。 結(jié)論通過單乳化法和碳二亞胺化學(xué)連接法成功制備了靶向HER2的液態(tài)氟碳高分子超聲造影劑，其粒徑較小，抗體連接率較高，具有相變潛能，有望成為HER2陽性腫瘤血管外顯影、治療的理想造影劑。 第二部分HER2靶向相變型高分子超聲造影劑對(duì)乳腺癌細(xì)胞的尋靶及抑制作用的初步研究 目的制備HER2靶向新型相變型高分子超聲造影劑，評(píng)價(jià)其體外腫瘤細(xì)胞尋靶能力及對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。 方法采用單乳化法及碳二亞胺化學(xué)連接法制備HER2靶向相變型高分子超聲造影劑。體外培養(yǎng)經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HER2/neu質(zhì)粒的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞；體外尋靶實(shí)驗(yàn)觀察靶向造影劑與MCF-7細(xì)胞的結(jié)合情況，并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行半定量分析；MTT法評(píng)價(jià)靶向超聲造影劑對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的抑制率的影響；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)靶向造影劑對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的凋亡率的影響。 結(jié)果成功制備了靶向HER2的相變型高分子超聲造影劑；體外尋靶實(shí)驗(yàn)顯示，該靶向造影劑較多并且牢固的聚集在表達(dá)HER2的MCF-7細(xì)胞表面，對(duì)照組未見造影劑和MCF-7細(xì)胞的結(jié)合現(xiàn)象；流式細(xì)胞術(shù)顯示，靶向造影劑與MCF-7細(xì)胞的平均連接率高達(dá)（98.51±1.32）%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于抗體封閉組和非靶向造影劑組；MTT法結(jié)果顯示靶向造影劑對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的12h、24h、48h的平均抑制率分別為（10.25±2.01）%、（17.96±1.64）%、（39.64±1.27）%，非靶向造影劑組對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的12h、24h、48h的平均抑制率分別為（4.12±0.63）%、（5.81±0.58）%、（8.13±0.78）%，并且12h和24h靶向造影劑組抑制率均高于非靶向造影劑組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示靶向造影劑組對(duì)MCF-7細(xì)胞的凋亡率[（38.67±1.44）%]明顯高于非靶向造影劑組[（6.91±0.52）%]和空白對(duì)照組[（3.20±0.21）%]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論靶向HER2的相變型高分子超聲造影劑對(duì)HER2陽性腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外靶向能力，并能明顯抑制HER2陽性的腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)，促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，有望成為HER2陽性腫瘤靶向診療的理想分子探針。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R445.1;R737.9
【圖文】：

圖 1.1 靶向高分子超聲造影劑光學(xué)顯微鏡(a)及熒光顯微鏡(b)圖(×800)Fig.1.1 Light microscope image(a) and fluorescence microscope image(b) of HER2-targepolymer ultrasound contrast agent (×800)a b圖 1.2 靶向高分子超聲造影劑粒徑(a)及電位(b)分布圖Fig 1.2 Size(a) and Zeta potential(b) distribution of HER2-targeted polymer ultrasou

圖 1.1 靶向高分子超聲造影劑光學(xué)顯微鏡(a)及熒光顯微鏡(b)圖(×800)Fig.1.1 Light microscope image(a) and fluorescence microscope image(b) of HER2-targetedpolymer ultrasound contrast agent (×800)a b

圖 1.3 激光共聚焦顯微鏡觀察靶向造影劑表面抗體連接情況：靶向造影劑表面呈現(xiàn)紅色熒光(a)與綠色熒光(b); a 與 b 的疊加圖為黃色熒光(c)Fig 1.3 Trastuzumab connectivity of Targeted contrast agent under Confocal microscopy:Red fluorescence(a) and green fluorescence(b) around the targeted contrast agent;superposition of a and b(c)

【參考文獻(xiàn)】

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1 曾益新;張曉實(shí);劉強(qiáng);;分子靶向治療:腫瘤治療的里程碑[J];癌癥;2008年08期

2 張迪;戈偉;;腫瘤分子靶向治療進(jìn)展[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

3 聶宇;段友容;石三軍;張志榮;李秀群;;一種合成的納米粒高分子材料的細(xì)胞毒性研究[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2009年01期

本文編號(hào)：2743164