【摘要】：目的運用彩色多普勒血流顯像( Color? Doppler? flow?imaging ,CDFI)評價兔腎缺血再灌注(Ischemia / Reperfusion ,I/R)后兔腎動脈血流動力學(xué)變化,并探討其與兔腎組織腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNF-α)表達變化的相關(guān)性,尋求一種無創(chuàng)、及時的評價腎缺血再灌注損傷的發(fā)生的可行方法。方法48只大白兔,不分雌雄,隨機分為假手術(shù)對照組、缺血再灌注(I/R)組。假手術(shù)對照組及缺血再灌注組又按缺血后再灌注時間長短的不同分為2 h、8 h、24 h 3個亞組,每個亞組8只。每組大白兔以2%戊巴比妥鈉1.5ml/kg沿耳緣靜脈注射進行麻醉。麻醉成功后,左腎區(qū)脫毛處理,盡量暴露皮膚。假手術(shù)對照組單純切除右腎,保留左腎,三個亞組保留左腎時間點分別為2h、8h、24h;缺血再灌注組切除右腎,用動脈夾夾閉左腎動靜脈,造成左腎缺血1h后恢復(fù)灌注,三個亞組恢復(fù)灌注的時間點不同,分別為再灌注2h、8h、24h。應(yīng)用CDFI分別監(jiān)測各個亞組大白兔左腎門部腎主動脈(master renal artery, MRA)、腎竇部段動脈(segment renal artery, SRA)、腎椎體兩側(cè)緣葉間動脈(interlobar arterial renal, IRA)這三級腎動脈的血流動力學(xué)變化,測定上述動脈的收縮期峰值流速(Peak systolic velocity ,Vmax)、舒張末期流速(End-diastolic velocity ,Vd)、搏動指數(shù)(Pulsatility index, PI)和阻力指數(shù)(Resistance index ,RI)。各組完成左腎動脈血流動力學(xué)測量后,在低溫條件下切除兔左腎,取部分兔左腎組織待測。利用免疫組化方法(SABC法)測定兔腎組織中TNF-α的平均光密度值(Optical density, OD),統(tǒng)計學(xué)方法為組間、組內(nèi)參數(shù)的比較采用方差齊性檢驗,單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義;將I/R組各個時間點的TNF-α的OD值與各級兔腎動脈的血流動力學(xué)作相關(guān)性分析,采用直線相關(guān)與直線回歸分析,計算相關(guān)系數(shù)r值及回歸方程,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果(1)血流動力學(xué)改變:①假手術(shù)2h亞組:腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為43.20±5.65 ( cm/s )、23.85±4.37 ( cm/s )、0.58±0.08、0.42±0.06 ;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為28.98±7.56(cm/s)、16.91±4.32 (cm/s)、0.50±0.05、0.38±0.08;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為19.43±5.89(cm/s)、12.86±3.14(cm/s)、0.47±0.13、0.35±0.07;②假手術(shù)8h亞組:腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為41.74±7.20( cm/s )、22.97±5.14(cm/s)、0.57±0.10、0.41±0.10;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為27.12±6.81 ( cm/s )、16.22±5.73 ( cm/s )、0.49±0.07、0.37±0.10;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為18.34±5.17(cm/s)、12.62±4.62(cm/s)、0.46±0.11、0.35±0.11;③假手術(shù)24h亞組:腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為42.98±5.44(cm/s)、23.58±7.08(cm/s)、0.57±0.11、0.42±0.08;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為28.65±7.43( cm/s )、17.56±6.13(cm/s)、0.49±0.10、0.38±0.06;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為19.71±3.57(cm/s)、13.32±4.54(cm/s)、0.47±0.09、 0.35±0.08;④缺血再灌注2h亞組:腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為46.23±4.53(cm/s)、24.36±6.19(cm/s)、0.67±0.18、0.47±0.14 ;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為30.40±3.15(cm/s)、18.52±2.86(cm/s)、0.61±0.10、0.44±0.09;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為20.65±3.83( cm/s )、11.92±3.27(cm/s)、0.59±0.08、0.40±0.07;⑤缺血再灌注8h亞組:腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為48.17±7.05(cm/s)、24.88±6.79(cm/s)、0.75±0.19、0.49±0.08;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為34.25±6.18 ( cm/s )、18.36±4.16 ( cm/s )、0.72±0.16、0.48±0.07;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為23.26±5.25(cm/s)、11.69±3.84(cm/s)、0.70±0.18、0.45±0.10。⑥缺血再灌注24h亞組,腎主動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為55.11±4.34 (cm/s)、20.60±7.87(cm/s)、1.09±0.54、0.63±0.13;段動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為37.71±3.53( cm/s )、17.67±2.99(cm/s)、0.97±0.14、0.57±0.11;葉間動脈Vmax、Vd、PI、RI分別為28.66±5.81 ( cm/s )、9.73±2.97 ( cm/s )、0.89±0.32、0.54±0.09;與假手術(shù)對照組比較,I/R 2 h亞組收縮期峰值流速Vmax、Vd、PI和RI均無明顯改變,I/R 8 h亞組兔腎SRA及IRA出現(xiàn)RI增大(P均0.05),I/R 24 h亞組兔腎MRA、SRA和IRA均出現(xiàn)Vmax、PI和RI增大(P均0.05)。與假手術(shù)對照組2h亞組TNF-αOD值(0.1302±0.027)比較,I/R 2h亞組TNF-αOD值(0.1607±0.033)無統(tǒng)計學(xué)差異;與對照組8h亞組TNF-αOD值(0.1321±0.030)、對照 組24h亞組TNF-αOD值(0.1405±0.028)比較,I/R8h亞組TNF-αOD值(0.1879±0.035)、I/R24h亞組TNF-αOD值(0.2658±0.040)均有統(tǒng)計學(xué)差異(P均0.05);且24 h內(nèi)有加重趨勢(P0.05)。缺血再灌注組腎主動脈的Vmax,PI,RI與腎組織TNF-αOD變化呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.714、0.764、0.782,P0.05);缺血再灌注組腎段動脈的Vmax,PI,RI與腎組織TNF-αOD變化呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.779、0.811、0.821,P0.05);缺血再灌注組腎葉間動脈的Vmax,PI,RI與腎組織TNF-αOD變化呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.833、0.788、0.828,P0.05)。各亞組Vd與腎組織TNF-α的表達變化均無相關(guān)性(P均0.05)。缺血再灌注組以腎主動脈不同時間點測得的RI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=1.823x+0.151。缺血再灌注組以腎段動脈的不同時間點測得的RI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=1.487x+0.193。缺血再灌注組以腎葉間動脈的不同時間點測得的RI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=1.452x+0.166。缺血再灌注組以腎主動脈不同時間點測得的PI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=5.007x-0.196。缺血再灌注組以腎段動脈的不同時間點測得的PI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=4.148x-0.084。缺血再灌注組以腎葉間動脈的不同時間點測得的PI作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=3.272x+0.050。缺血 再灌注組以腎主動脈不同時間點測得的Vmax作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x ,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=72.86x+33.23。缺血再灌注組以腎段動脈的不同時間點測得的Vmax作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=71.17x+19.44。缺血再灌注組以腎葉間動脈的不同時間點測得的Vmax作為應(yīng)變量y,將TNF-αOD值作為自變量x,進行直線回歸分析,直線回歸方程為:y=81.21x+7.821。結(jié)論與假手術(shù)對照組比較,缺血再灌注8h后兔腎動脈的RI開始增高,并首先發(fā)生在末梢血管;缺血再灌注24h各級兔腎動脈均出現(xiàn)Vmax、PI和RI增大。與假手術(shù)對照組比較,缺血再灌注8h后TNF-αOD開始出現(xiàn)增高,且在24h內(nèi)有逐漸加重的趨勢。I/R各亞組兔腎動脈Vmax、PI、RI的變化與兔腎組織中TNF—α的表達兩者有很好的相關(guān)性。利用CDFI檢測缺血再灌注的腎動脈的血流動力學(xué)變化是一種無創(chuàng)、及時的評價腎缺血再灌注損傷發(fā)生的可行方法。
【圖文】：

圖12,13)． 且再灌注8h亞組與24小時亞組TNF-α的表達水平相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0．O5)．再灌注24小時TNF-α的表達水平達到高峰(見表4,圖14、15) 。表 4 各組腎組織 TNF-α 比較（ x ± s）Table 4 each group comparison of TNF-α（x ±s）組別I/R 各時間點 TNF-α 的 OD 值2 h 8 h 24 h假手術(shù)對照組 0.1302±0.027 0.1321±0.030 0.1405±0.028I/R 組 0.1607±0.033 0.1879±0.035*0.2658±0.040*注：缺血再灌注組與假手術(shù)對照組比較，*P<0.05 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。Note: I / R subgroups compared with the sham operation group, *P <0.05 there are significant statistical difference. 圖 14 假手術(shù)對照組及缺血再灌注組各亞組 TNF-αOD 直方圖Diagram14 I / R subgroups and the sham operation group OD of TNF-α histogram

圖 15 缺血再灌注組各亞組 TNF-αOD 直方圖Diagram15 I / R subgroups OD of TNF-α histogram組織學(xué)的觀察缺血再灌注后2h：腎小管開始出現(xiàn)腫脹，部分細胞出現(xiàn)空泡樣變再灌注后8h：腎小管腫脹加重，管腔內(nèi)出現(xiàn)壞死脫落組織（圖1再灌注后24h：腎小管損傷程度最重，表現(xiàn)為大片腎小管上皮細空泡樣，腎小管中可見大量死亡脫落細胞殘留物質(zhì)，，間質(zhì)及小管胞浸潤（圖17）。腎組織學(xué)的改變表明缺血再灌注損傷模型建腎動脈血流動力學(xué)變化與腎組織TNF-α表達變化的直線相關(guān)分析
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R445.1

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6 張U

本文編號：2677218