發(fā)布時(shí)間：2017-03-25 02:11

  本文關(guān)鍵詞：CRIF1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輻射氧化應(yīng)激中的作用及其機(jī)制初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 隨著核能與核技術(shù)的廣泛應(yīng)用，人類遭受輻射的機(jī)會(huì)也越來越多，其中包括核事故和輻射源事故的潛在威脅、放療患者和相關(guān)行業(yè)從業(yè)人員的正常細(xì)胞被動(dòng)遭受殺傷等。輻射主要造成人體的血液、胃腸消化、神經(jīng)和皮膚等一個(gè)或多個(gè)系統(tǒng)損傷，與輻射劑量、時(shí)間密切相關(guān)。輻射損傷救治的研究一直受到廣大學(xué)者關(guān)注，尤其是急性重型輻射損傷因發(fā)生早、進(jìn)展快、損傷重、嚴(yán)重骨髓免疫功能受損、并發(fā)癥等原因，救治成功率低，缺乏有效的治療方法。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種參與構(gòu)成骨髓造血微環(huán)境的多能干細(xì)胞，對(duì)輻射的耐受性比造血干細(xì)胞強(qiáng)，是輻射損傷后的造血恢復(fù)和重建的重要結(jié)構(gòu)和功能組成。但骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輻射耐受的機(jī)制尚不清楚。因此我們深入研究其輻射耐受機(jī)制，對(duì)于輻射防護(hù)和輻射損傷尤其重度急性放射病的救治具有十分重要的意義。 目的： 證實(shí)CRIF1參與BMSCs輻射損傷的早期氧化應(yīng)激反應(yīng)，初步探討其分子機(jī)制。 方法：改良BMSCs體外培養(yǎng)體系，，分離擴(kuò)增鑒定BMSCs，建立體外輻照BMSCs細(xì)胞模型，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)輻射后12小時(shí)內(nèi)CRIF1、NRF2的mRNA水平，WB技術(shù)檢測(cè)CRIF1蛋白水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMSCs細(xì)胞周期分布，并構(gòu)建CRIF1的過表達(dá)和抑制表達(dá)載體。 結(jié)果： 1、采用含10%胎牛血清的α-MEM的改良培養(yǎng)體系，從人骨髓中分離、培養(yǎng)具有塑料底物粘附性的細(xì)胞，目的細(xì)胞的CD45陽性率為5.57%，CD90為99.9%，CD14為1.62%，CD73為95.55%，CD34為0.46%，CD105為57.13%。體外成功誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化；與傳統(tǒng)培養(yǎng)體系比較，改良培養(yǎng)體系BMSCs的集落形成能力(集落個(gè)數(shù)11.3±1.53VS8.0±1.0，p0.05；單個(gè)集落平均細(xì)胞數(shù)目66.5±14.4VS59.2±8.2，p0.05)和細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期4天VS10天；平臺(tái)期15天VS19天)。 2、輻照后早期12小時(shí)，BMSCs的G1期比例在低劑量時(shí)(5Gy)，隨時(shí)間延長(zhǎng)增加，高劑量(20Gy)時(shí)隨時(shí)間延長(zhǎng)降低；G2期比例隨時(shí)間延長(zhǎng)、劑量增加而逐漸升高；S期比例隨時(shí)間延長(zhǎng)、劑量增加而逐漸降低。 3、BMSCs輻照后的早期12小時(shí)，CRIF1的mRNA表達(dá)量先下降，后上升至正常水平，其蛋白表達(dá)也呈相同趨勢(shì)。 NRF2的mRNA表達(dá)趨勢(shì)與CRIF1完全相反，表現(xiàn)為先上升，后下降至正常水平。 4、成功構(gòu)建了CRIF1過表達(dá)載體pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP和CRIF1抑制表達(dá)載體pGreenPuro-CRIF1，其滴度均為1×10~8TU/ml。 結(jié)論： 1、成功建立改良的BMSCs體外分離培養(yǎng)體系，并且該方法培養(yǎng)的BMSCs體外擴(kuò)增速度、增殖能力、克隆形成能力均明顯改善。 2、在低劑量輻照損傷時(shí), BMSCs出現(xiàn)G1期阻滯現(xiàn)象，可能與損傷修復(fù)有關(guān)；CRIF1可能通過與NRF2相互作用啟動(dòng)其下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶基因表達(dá)調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)。 3、成功構(gòu)建了CRIF1過表達(dá)載體和抑制表達(dá)載體。
【關(guān)鍵詞】：CRIF1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 輻射損傷 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R818.74
【目錄】：

• 縮略語表4-7
• Abstract7-10
• 摘要10-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 改良培養(yǎng)體系下間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、擴(kuò)增、鑒定及狀態(tài)比較14-28
• 2.1 材料與方法14-18
• 2.2 結(jié)果18-25
• 2.3 討論25-27
• 2.4 結(jié)論27-28
• 第三章 CRIF1 在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輻射氧化應(yīng)激中的作用及機(jī)制初步研究28-41
• 3.1 材料與方法29-34
• 3.2 結(jié)果34-37
• 3.3 討論37-40
• 3.4 結(jié)論40-41
• 第四章 CRIF1 慢病毒過表達(dá)載體和 siRNA 抑制表達(dá)載體的構(gòu)建41-60
• 4.1 材料與方法41-45
• 4.2 結(jié)果45-57
• 4.3 討論57-59
• 4.4 結(jié)論59-60
• 全文總結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-67
• 文獻(xiàn)綜述67-78
• 參考文獻(xiàn)72-78
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文78-79
• 致謝79

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：266518