發(fā)布時(shí)間：2017-08-23 17:20

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶乳酸桿菌的構(gòu)建及其對(duì)獺兔生產(chǎn)性能和免疫性能的影響

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【摘要】：動(dòng)物飼料中含有大量的纖維素,其特殊的結(jié)構(gòu)很難被動(dòng)物胃腸道降解吸收而隨糞便排出。動(dòng)物腸道內(nèi)某些微生物通過產(chǎn)生纖維素酶來幫助降解纖維素。因此,篩選生長(zhǎng)快、產(chǎn)酶活力高的纖維素分解細(xì)菌,是得到纖維素酶的一個(gè)有效方法。乳酸菌存在于動(dòng)物腸道中,通過競(jìng)爭(zhēng)或產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物來拮抗有害微生物的快速增殖,從而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)和免疫能力,是抗生素的有效替代物。本試驗(yàn)分別從獺兔盲腸和回腸內(nèi)容物中分離出高產(chǎn)纖維素酶的細(xì)菌和乳酸桿菌,并對(duì)所篩選的產(chǎn)纖維素酶的菌株進(jìn)行種屬鑒定,研究纖維素酶產(chǎn)生菌的酶學(xué)性質(zhì),并將纖維素酶產(chǎn)生菌的內(nèi)切葡聚糖酶基因克隆到植物乳桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,構(gòu)建具有纖維素酶活性的植物乳桿菌。飲水添加給30日齡斷奶獺兔,研究其對(duì)30日齡斷奶獺兔生長(zhǎng)性能和免疫性能的影響,為內(nèi)切葡聚糖酶植物乳桿菌在獺兔生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。本試驗(yàn)研究結(jié)果如下:1從獺兔盲腸和回腸腸道內(nèi)分別篩選出一株高產(chǎn)纖維素酶的細(xì)菌和乳酸桿菌,經(jīng)鑒定分別是枯草芽孢桿菌和植物乳酸桿菌�？莶菅挎邨U菌在pH為7.0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h,產(chǎn)纖維素酶酶活性最高;其所產(chǎn)纖維素酶在溫度為60℃、pH為7.0的條件下,分解纖維素的能力最高。該酶在pH 4.0~8.0的范圍內(nèi)依然表現(xiàn)出一定的水解能力。2利用引物擴(kuò)增枯草芽孢桿菌的內(nèi)切葡聚糖酶基因,將內(nèi)切葡聚糖酶基因與表達(dá)載體pLEM415連接后電轉(zhuǎn)化入植物乳桿菌感受態(tài)細(xì)胞中,構(gòu)建轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶乳酸桿菌(L.plantarum pLEM-cel)。經(jīng)檢測(cè),該L.plantarum pLEM-cel具有0.046U/mL的纖維素酶活性。3選取60只30日齡健康獺兔,隨機(jī)分為A、B、C 3組,每組20只,每只為一個(gè)重復(fù)。其中A組飲水添加10mL 107 cfu/mL L.plantarum pLEM-cel,B組飲水添加10mL107 cfu/mL植物乳桿菌,C組為對(duì)照組,飲水添加10mL滅菌的冷凍保護(hù)劑(配方見附錄6)。兩天一次。預(yù)飼期4 d,正飼期31 d。正飼期結(jié)束后每組選擇10只進(jìn)行屠宰采樣,檢測(cè)生產(chǎn)和免疫指標(biāo)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),內(nèi)切葡聚糖酶植物乳桿菌組獺兔的料重比顯著低于對(duì)照組,內(nèi)切葡聚糖酶植物乳桿菌組獺兔的的全凈膛率、胸腺指數(shù)、十二指腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度、回腸絨毛高度、血清IgG和腸粘膜SIgA含量顯著均高于對(duì)照組。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶乳酸桿菌能顯著降低獺兔的料重比,提高獺兔的生產(chǎn)性能,同時(shí)可以顯著提高獺兔的全凈膛率和免疫能力。綜上所述,本試驗(yàn)構(gòu)建的內(nèi)切葡聚糖酶植物乳桿菌能夠提高獺兔的生長(zhǎng)和免疫性能。
【關(guān)鍵詞】：獺兔 纖維素酶 植物乳桿菌 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶乳酸桿菌
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S829.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• abstract8-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-26
• 1.1 纖維素13-14
• 1.2 纖維素酶14-21
• 1.2.1 纖維素酶的酶切機(jī)制14-15
• 1.2.2 纖維素酶在動(dòng)物生產(chǎn)上的應(yīng)用15-17
• 1.2.3 纖維素分解菌17-21
• 1.3 乳酸桿菌21-23
• 1.3.1 乳酸桿菌的簡(jiǎn)介21-22
• 1.3.2 植物乳桿菌22
• 1.3.3 乳酸桿菌與植物乳桿菌在動(dòng)物中的應(yīng)用22-23
• 1.4 轉(zhuǎn)基因細(xì)菌的研究進(jìn)展23-24
• 1.5 研究的目的與意義24-26
• 第二章 兔源纖維素分解菌與乳酸桿菌的分離鑒定26-40
• 2.1 材料與方法26-29
• 2.1.1 樣品來源26
• 2.1.2 培養(yǎng)基與試劑26-27
• 2.1.3 纖維素分解菌的分離篩選27
• 2.1.4 乳酸桿菌的篩選鑒定27
• 2.1.5 纖維素酶活力的測(cè)定27
• 2.1.6 纖維素分解菌及乳酸桿菌的種屬鑒定27-28
• 2.1.7 乳酸菌感受態(tài)細(xì)胞的制備28
• 2.1.8 纖維素分解菌生長(zhǎng)條件和產(chǎn)酶能力的研究28
• 2.1.9 纖維素酶酶反應(yīng)條件的研究28-29
• 2.2 結(jié)果與分析29-37
• 2.2.1 纖維素分解細(xì)菌的篩選29
• 2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制29-30
• 2.2.3 纖維素分解菌的種屬鑒定30-33
• 2.2.4 乳酸菌的種屬鑒定33-35
• 2.2.5 纖維素分解菌生長(zhǎng)條件和產(chǎn)酶能力的研究35-36
• 2.2.6 纖維素酶酶反應(yīng)條件的研究36-37
• 2.3 討論37-39
• 2.3.1 纖維素分解菌的分離鑒定37-38
• 2.3.2 纖維素分解菌產(chǎn)酶條件和酶學(xué)特性的研究38
• 2.3.3 乳酸桿菌的分離鑒定38-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 第三章 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的構(gòu)建40-46
• 3.1 材料與方法40-42
• 3.1.1 菌株與質(zhì)粒40
• 3.1.2 試驗(yàn)試劑40
• 3.1.3 試驗(yàn)引物40-41
• 3.1.4 內(nèi)切葡聚糖酶基因的PCR擴(kuò)增41
• 3.1.5 膠回收41
• 3.1.6 連接T載體及細(xì)菌轉(zhuǎn)化41
• 3.1.7 質(zhì)粒的提取及鑒定41-42
• 3.1.8 質(zhì)粒p MD-19T-JT與穿梭載體p LEM415的雙酶切與連接42
• 3.1.9 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的構(gòu)建42
• 3.1.10 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的檢測(cè)42
• 3.2 結(jié)果與分析42-44
• 3.2.1 內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆42-43
• 3.2.2 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的構(gòu)建43
• 3.2.3 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌酶活性分析43-44
• 3.3 討論44-45
• 3.3.1 內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆44
• 3.3.2 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌的構(gòu)建與檢測(cè)44-45
• 3.4 小結(jié)45-46
• 第四章 乳酸桿菌工程菌對(duì)獺兔生產(chǎn)性能與免疫性能的影響46-53
• 4.1 材料與方法46-48
• 4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)菌株46
• 4.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)46
• 4.1.3 試驗(yàn)日糧46-47
• 4.1.4 飼養(yǎng)管理47
• 4.1.5 試驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定與方法47-48
• 4.1.6 數(shù)據(jù)處理48
• 4.2 結(jié)果與分析48-50
• 4.2.1 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌對(duì)獺兔生長(zhǎng)性能與屠宰性能的影響48-49
• 4.2.2 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌對(duì)獺兔免疫性能的影響49-50
• 4.3 討論50-52
• 4.3.1 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌對(duì)獺兔生產(chǎn)性能與屠宰性能的影響50-52
• 4.3.2 轉(zhuǎn)內(nèi)切葡聚糖酶基因乳酸桿菌對(duì)獺兔免疫性能的影響52
• 4.4 小結(jié)52-53
• 第五章 研究結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)53-54
• 5.1 研究結(jié)論53
• 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)53
• 5.3 有待進(jìn)一步研究的內(nèi)容53-54
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 附錄62-65
• 致謝65-66
• 作者簡(jiǎn)介66

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