本文關(guān)鍵詞：CART在不同發(fā)育階段牛卵泡顆粒細(xì)胞中的表達(dá)和定位

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【摘要】：【目的】探討牛卵泡顆粒細(xì)胞中可卡因-苯丙胺調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)的表達(dá)對(duì)牛不同階段卵泡發(fā)育的影響�！痉椒ā客ㄟ^對(duì)牛卵泡轉(zhuǎn)錄組ODF1(the largest onset of deviation follicle)和ODF2(the second largest onset of deviation follicle)顆粒細(xì)胞(granulesa cells,GCs)構(gòu)建RNA文庫(kù),Illumina Hi Seq 2000平臺(tái)測(cè)序;采集屠宰牛雙側(cè)卵巢,通過黃體形態(tài)特征篩選處于第一卵泡波階段的最大卵泡和第二大卵泡;分別抽取卵泡液,競(jìng)爭(zhēng)性ELISA法測(cè)定卵泡液雌激素(estrodiol,E2)和孕酮(progestin,P)濃度,確定優(yōu)勢(shì)卵泡(dominant follicles,DF)和從屬卵泡(subordinate follicles,SF);分別分離DF和SF顆粒細(xì)胞(granulosa cells,GCs),提取總RNA;設(shè)定3個(gè)重復(fù)樣本,以RPLP0作為內(nèi)參基因,設(shè)計(jì)引物在牛DF和SF進(jìn)行q RT-PCR表達(dá)量檢測(cè),Graph Pad Prism 5.0作圖并進(jìn)行顯著性分析;兔抗CART一抗檢測(cè)CART在牛卵泡的表達(dá)�！窘Y(jié)果】轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示,CART在ODF1的表達(dá)量是ODF2的38.2倍;通過黃體形態(tài)特征及激素測(cè)定共篩選出3頭牛的卵泡發(fā)育處于第一卵泡波,并獲得DF和SF;q RT-PCR結(jié)果顯示CART在DF與SF的表達(dá)量差異極顯著(P0.01),高達(dá)2 310倍,與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果的表達(dá)差異趨勢(shì)一致;免疫組化結(jié)果表明,CART在牛DF和SF中均有表達(dá),且DF表達(dá)量明顯高于SF,同時(shí),CART主要在卵泡顆粒細(xì)胞層表達(dá)�！窘Y(jié)論】在牛卵泡發(fā)育過程中,卵泡發(fā)育選擇期有其它抑制因子抑制了大多數(shù)卵泡的發(fā)育,阻止其成為DF;當(dāng)出現(xiàn)偏差后,CART的高表達(dá)抑制了DF進(jìn)入排卵期,推測(cè)CART可能是通過促進(jìn)卵泡顆粒細(xì)胞的凋亡,進(jìn)一步抑制了顆粒細(xì)胞層E2的分泌,最終導(dǎo)致DF閉鎖。
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 牛 卵泡 發(fā)育 CART 表達(dá)
【基金】：國(guó)家自然基金(31172211) 農(nóng)業(yè)部“948”項(xiàng)目(2010-Z43) 山西省橫向協(xié)作與委托項(xiàng)目(2010HX54) 山西省回國(guó)留學(xué)人員科研資助項(xiàng)目(2014-重點(diǎn)5) 山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20130311027-2) 山西省人事廳人才引進(jìn)項(xiàng)目 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才博士科研啟動(dòng)費(fèi)(2014ZZ04) 科研管理費(fèi)資助重大項(xiàng)目和標(biāo)志性成果培育項(xiàng)目(71060003)
【分類號(hào)】：S823
【正文快照】： 0引言【研究意義】單胎動(dòng)物在一個(gè)發(fā)情周期均會(huì)出現(xiàn)2—3個(gè)卵泡發(fā)育波,一般只有最后一個(gè)卵泡波中的優(yōu)勢(shì)卵泡最終排卵,排卵率低一直是影響單胎家畜繁殖環(huán)節(jié)的關(guān)鍵因素�？煽ㄒ�-苯丙胺調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)屬于動(dòng)物下丘腦分泌的神經(jīng)肽,

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