本文關(guān)鍵詞：湖北山羊藍(lán)舌病血清學(xué)調(diào)查及病原分離與鑒定

  更多相關(guān)文章： 藍(lán)舌病 血清學(xué)監(jiān)測(cè) 病原分離 病毒鑒定

【摘要】：[目的]通過(guò)對(duì)湖北省山羊藍(lán)舌病的血清學(xué)調(diào)查和病原的分離與鑒定,了解了藍(lán)舌病在當(dāng)?shù)氐牧餍星闆r,為藍(lán)舌病的預(yù)防提供依據(jù)。[方法]采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(C-ELISA),對(duì)湖北省鄖西、襄陽(yáng)、興山、夷陵、荊州、麻城、江夏7個(gè)市(縣、區(qū))506份山羊血清進(jìn)行了藍(lán)舌病抗體檢測(cè)。選擇其陽(yáng)性率與平均陽(yáng)性率相近的興山建立藍(lán)舌病易感動(dòng)物監(jiān)測(cè)點(diǎn),對(duì)抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的山羊血液樣品進(jìn)行雞胚靜脈接種增毒和BHK-21細(xì)胞分離病毒,通過(guò)VP3 BTV核酸檢測(cè)、酶切鑒定、序列分析等進(jìn)行鑒定。[結(jié)果]血清學(xué)調(diào)查檢測(cè)出藍(lán)舌病抗體陽(yáng)性血清130份,平均陽(yáng)性率為25.69%,其中鄖西陽(yáng)性率最高,為38.33%；荊州陽(yáng)性率最低,為4%。2015年4月到11月份,監(jiān)測(cè)點(diǎn)血清檢測(cè)有一只山羊的藍(lán)舌病抗體呈陽(yáng)性,其陽(yáng)性率一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì),最后趨于穩(wěn)定,且8月份的抗體陽(yáng)性率最高。從轉(zhuǎn)陽(yáng)前血液樣品中分離獲得一株病毒,通過(guò)VP3基因?qū)Ρ辱b定,證實(shí)分離病毒為BTV,并命名為HB201508,與DQ186828相似性最高,為94.9%,與毒株JN255914相似性最低,為80.2%。[結(jié)論]湖北境內(nèi)山羊普遍存在BTV的感染,且不同地區(qū)動(dòng)物的陽(yáng)性率的分布存在差異；從監(jiān)測(cè)點(diǎn)的山羊血液中分離到1株藍(lán)舌病病毒,為湖北省藍(lán)舌病防控提供了重要的參考依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：藍(lán)舌病 血清學(xué)監(jiān)測(cè) 病原分離 病毒鑒定
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.27
【目錄】：

• 摘要8-9
• 前言9-16
• 1 藍(lán)舌病流行狀況9-10
• 1.1 國(guó)外流行狀況9-10
• 1.2 國(guó)內(nèi)流行狀況10
• 2 流行病學(xué)10-11
• 3 BTV病原學(xué)11-13
• 3.1 BTV的結(jié)構(gòu)11
• 3.2 BTV結(jié)構(gòu)蛋白11-12
• 3.2.1 外殼蛋白VP2和VP511
• 3.2.2 內(nèi)衣殼蛋白VP3和VP711-12
• 3.2.3 微量蛋白VP1、VP4和VP612
• 3.3 非結(jié)構(gòu)蛋白12-13
• 3.4 病毒特性13
• 4 發(fā)病機(jī)理與免疫應(yīng)答13
• 5 臨床癥狀和病理變化13-14
• 6 診斷14-15
• 6.1 臨床診斷14
• 6.2 實(shí)驗(yàn)室診斷14-15
• 6.2.1 分子生物學(xué)檢測(cè)14
• 6.2.2 血清學(xué)檢測(cè)方法14-15
• 7 防控措施15
• 8 研究目的與意義15-16
• 材料與方法16-30
• 1 材料16-18
• 1.1 試驗(yàn)樣品、雞胚與細(xì)胞16
• 1.2 主要設(shè)備和儀器16-17
• 1.3 試驗(yàn)主要試劑17
• 1.3.1 C-ELISA主要試劑17
• 1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑17
• 1.3.3 核酸電泳相關(guān)試劑17
• 1.3.4 病毒核酸鑒定相關(guān)試劑17
• 1.4 主要試劑的配制17-18
• 1.5 引物的合成18
• 2 方法18-30
• 2.1 湖北省山羊BTV清流行病學(xué)調(diào)查18-21
• 2.1.1 樣品及信息的采集18-19
• 2.1.2 樣品處理19-20
• 2.1.3 相關(guān)性分析方法20-21
• 2.2 監(jiān)控點(diǎn)的設(shè)立與監(jiān)測(cè)21
• 2.2.1 監(jiān)控點(diǎn)的選擇21
• 2.2.2 監(jiān)控動(dòng)物群設(shè)置21
• 2.2.3 樣品采集21
• 2.2.4 抗體監(jiān)測(cè)方法21
• 2.3 病毒分離21-24
• 2.3.1 接種樣品的處理21
• 2.3.2 雞胚的準(zhǔn)備21-22
• 2.3.3 雞胚接種22
• 2.3.4 雞胚收獲22-23
• 2.3.5 細(xì)胞接種23-24
• 2.3.6 病毒分離物保存24
• 2.4 病毒鑒定24-30
• 2.4.1 細(xì)胞分離物RNA提取24-25
• 2.4.2 PCR擴(kuò)增25-26
• 2.4.3 PCR產(chǎn)物膠回收26-27
• 2.4.4 載體連接27
• 2.4.5 感受態(tài)細(xì)胞DH5α的制備(CaCl2法)27
• 2.4.6 DH5α感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化27-28
• 2.4.7 質(zhì)粒的提取28
• 2.4.8 酶切鑒定28
• 2.4.9 序列分析28-30
• 試驗(yàn)結(jié)果30-38
• 1 湖北省山羊BTV血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果30-32
• 1.1 BTV抗體檢測(cè)結(jié)果30
• 1.2 相關(guān)性分析結(jié)果30-32
• 1.2.1 地理位置與血清陽(yáng)性率相關(guān)性分析30
• 1.2.2 氣候與血清陽(yáng)性率相關(guān)性分析30-32
• 2 監(jiān)控動(dòng)物抗體檢測(cè)結(jié)果32-33
• 3 病毒分離結(jié)果33-35
• 3.1 雞胚接毒結(jié)果33-34
• 3.2 細(xì)胞接毒結(jié)果34-35
• 4 病毒鑒定結(jié)果35-38
• 4.1 PCR擴(kuò)增35
• 4.2 酶切鑒定35-36
• 4.3 基因序列分析36-37
• 4.4 基因進(jìn)化分析37-38
• 討論38-40
• 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• Abstract46-48
• 致謝48

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本文編號(hào)：714457