本文關(guān)鍵詞：雞ERα基因胚胎組織表達(dá)差異及其啟動子活性分析

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【摘要】：禽類作為研究其他脊椎動物的重要模式生物,其性別分化和性腺發(fā)育的相關(guān)研究一直是發(fā)育生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。性激素在性別分化和性腺發(fā)育方面起到了重要的作用,有研究表明雌激素合成的關(guān)鍵酶芳香化酶可以導(dǎo)致雄性雞胚的雌性化,這說明雌激素在雞胚早期性腺發(fā)育中起到重要作用。雞雌激素受體cERα基因有五個(gè)啟動子,分別啟動轉(zhuǎn)錄形成多個(gè)5’UTR不同的c ERαmRNA剪切體,本研究擬對雞胚胎期cERα基因的多個(gè)剪切體進(jìn)行研究,用實(shí)時(shí)熒光量PCR的方法對cERα基因多個(gè)剪切體在雞胚五個(gè)時(shí)期八個(gè)組織中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明cERα基因的B、C、D三種剪切體在雞胚五個(gè)時(shí)期(E10.5、E12.5、E14.5、E16.5、E18.5)八個(gè)組織(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦泡、肌肉、性腺)中均有表達(dá),在性腺中表達(dá)量最高,且在雌雄兩性中呈現(xiàn)表達(dá)差異,均為雌性表達(dá)量高于雄性;根據(jù)cERα基因的B、C、D三種剪切體均在性腺中高表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,進(jìn)一步對三種剪切體在性腺中的相對表達(dá)情況進(jìn)行了定量檢測,發(fā)現(xiàn)三種剪切體在不同時(shí)期性腺中的相對表達(dá)趨勢基本一致,且雌性均在E14.5時(shí)表達(dá)量下調(diào),三種剪切體的相對表達(dá)水平表現(xiàn)為CDB;同時(shí)使用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的方法在CEF、DF1和PK15三種細(xì)胞系中對六個(gè)啟動子(A1、A2、A12、B、C、D)重組載體進(jìn)行了活性檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在CEF、DF1細(xì)胞中均檢測到了啟動子活性,PK15細(xì)胞中沒有檢測到啟動子活性。CEF細(xì)胞中啟動子重組載體相對活性表現(xiàn)為DBCA12A1A2,DF1細(xì)胞中相對活性為DA12A2CBA1,其中D啟動子的活性均遠(yuǎn)高于其他幾個(gè)啟動子,啟動子重組載體A12(包含啟動子A1和A2)的活性均大于單獨(dú)的啟動子A1和A2,推測啟動子A1和A2之間存在互作。
【關(guān)鍵詞】：雞 ERα基因 剪切體 啟動子
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-11
• 1 前言11-21
• 1.1 研究問題的由來11-12
• 1.2 雞的性別決定及性分化機(jī)制12-14
• 1.2.1 性別決定假說12-13
• 1.2.2 性腺的發(fā)育過程13-14
• 1.3 雌激素與性別分化14-16
• 1.3.1 雌激素14-15
• 1.3.2 ERα 基因15-16
• 1.4 ERα 基因的選擇性剪切16-20
• 1.4.1 選擇性剪切16-18
• 1.4.2 ERα 的選擇性剪切18-20
• 1.5 研究目的與意義20-21
• 2 材料與方法21-35
• 2.1 材料21-24
• 2.1.1 主要載體和細(xì)胞系21
• 2.1.2 主要試劑及溶液的配制21-23
• 2.1.3 主要儀器23
• 2.1.4 生物信息學(xué)分析相關(guān)軟件和數(shù)據(jù)庫23-24
• 2.2 方法24-35
• 2.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測24-25
• 2.2.2 雙熒光素酶基因報(bào)告載體檢測ERα 基因啟動子的活性25-31
• 2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染31-35
• 3 結(jié)果35-48
• 3.1 ERα 基因不同剪切體表達(dá)情況的檢測35-45
• 3.1.1 B剪切體在不同時(shí)期各組織中的相對表達(dá)量35-38
• 3.1.2 C剪切體在不同時(shí)期各組織中的相對表達(dá)量38-41
• 3.1.3 D剪切體在不同時(shí)期各組織中的相對表達(dá)量41-44
• 3.1.4 B、C、D三種剪切體在不同時(shí)期性腺中的相對表達(dá)量44-45
• 3.2 ERα 基因不同啟動子活性檢測45-48
• 3.2.1 雙熒光素酶報(bào)告基因重組載體的構(gòu)建45-46
• 3.2.2 雙熒光素酶活性的檢測46-48
• 4 討論48-52
• 4.1 ERα 基因剪切體在不同時(shí)期各組織中具有不同的表達(dá)水平48-50
• 4.2 ERα 基因啟動子在不同細(xì)胞中具有不同的活性50-52
• 5 小結(jié)52-53
• 5.1 本研究所取得的結(jié)果52
• 5.2 下一步需要研究的問題52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 致謝60-61

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5 ;[J];;年期

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1 高鵬;王平章;于鵬;彭智;彭亮;李娜;石太平;馬大龍;;TNFRSF1A新的分泌型剪切體的克隆、表達(dá)和活性驗(yàn)證[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

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本文編號：660207