本文關鍵詞：豬流行性腹瀉病毒E和M蛋白的表達及鑒定

  更多相關文章： PEDV E基因 M基因 桿狀病毒表達系統(tǒng) 多克隆抗體

【摘要】：豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種急性的、高度傳染性的腸道疾病,5日齡內的仔豬感染后死亡率可達100%,給養(yǎng)豬業(yè)帶來極大危害。接種疫苗是預防和控制PED的有效方法,但還沒有特別有效的疫苗控制PED發(fā)生,因此研制新型、有效的PED疫苗是目前急需解決的問題。PEDV是由囊膜包裹的單條正鏈RNA病毒,基因組大小約為28kb。PEDV的膜糖蛋白(M)能夠誘導機體產生針對PEDV的中和抗體,并且共表達M蛋白和E蛋白可與原病毒一樣誘導機體產生干擾素,增強抗病毒的能力。因此,M蛋白和E蛋白成為PEDV基因工程疫苗的主要抗原。本研究先將PEDV E、M基因分別克隆至原核表達載體p ET-32a,重組載體轉入BL21細胞后,經(jīng)IPTG誘導表達E、M蛋白,純化后免疫BALB/c小鼠,制備E、M多克隆抗體。再將PEDV E和M基因克隆至p Fast Bac Dual載體,利用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達E和M蛋白,用制備的多克隆抗體對其進行檢測,結果顯示這兩個蛋白與制備的E、M多克隆抗體有良好的反應性。本實驗成功制備PEDV多抗,并且利用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)成功的表達出PEDV E和M蛋白,為PEDV的檢測及PEDV疫苗的進一步研究奠定基礎。
【關鍵詞】：PEDV E基因 M基因 桿狀病毒表達系統(tǒng) 多克隆抗體
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.651
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-10
• 英文縮寫詞注釋10-11
• 引言11-12
• 第一篇 文獻綜述12-19
• 1 豬流行性腹瀉簡介12-17
• 1.1 豬流行性腹瀉病毒的生物學研究12-15
• 1.1.1 PEDV的分子特征12-15
• 1.2 豬流行性腹瀉的診斷15
• 1.3 豬流行性腹瀉病毒的疫苗研究15-17
• 1.3.1 滅活疫苗16
• 1.3.2 細胞弱毒苗16
• 1.3.3 轉基因植物疫苗16-17
• 1.3.4 核酸疫苗17
• 2 昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)17-19
• 2.1 桿狀病毒17-18
• 2.2 桿狀病毒表達系統(tǒng)的優(yōu)點18-19
• 2.2.1 基因容量大18
• 2.2.2 外源蛋白的表達量高且具有生物活性18
• 2.2.3 生物安全性高18-19
• 第二篇 研究內容19-53
• 第1章 豬流行性腹瀉病毒E、M基因的原核表達及多克隆抗體的制備19-38
• 1.1 實驗材料與試劑19-21
• 1.1.1 實驗材料19
• 1.1.2 實驗動物19-20
• 1.1.3 儀器設備20
• 1.1.4 主要實驗試劑20-21
• 1.2 實驗方法21-28
• 1.2.1 豬腹瀉三聯(lián)疫苗總RNA的提取21
• 1.2.2 PEDV E、M基因引物的設計和合成21-22
• 1.2.3 PEDV E、M目的基因的獲取22-23
• 1.2.4 重組表達載體p ET-32a-E、p ET-32a-M的構建與鑒定23-24
• 1.2.5 PEDV E、M蛋白的表達及鑒定24-26
• 1.2.6 PEDV E、M蛋白的純化26-27
• 1.2.7 小鼠抗E、M蛋白多克隆抗體的制備及特異性鑒定27-28
• 1.3 結果28-37
• 1.3.1 豬腹瀉三聯(lián)疫苗總RNA的提取28
• 1.3.2 PEDV E、M目的基因的獲取28-29
• 1.3.3 重組表達載體p ET32a-E、p ET32a-M的構建與鑒定29-32
• 1.3.4 PEDV E、M蛋白的鑒定32-34
• 1.3.5 純化后重組蛋白的SDS-PAGE分析34-36
• 1.3.6 多抗的鑒定36-37
• 1.4 討論37
• 1.5 小結37-38
• 第2章 豬流行性腹瀉病毒樣E、M蛋白的真核表達及鑒定38-53
• 2.1 實驗材料與試劑38-39
• 2.1.1 實驗材料38
• 2.1.2 儀器設備38-39
• 2.1.4 實驗試劑39
• 2.2 實驗方法39-46
• 2.2.1 PEDV E、M基因引物的設計和合成39-40
• 2.2.2 PEDV E、M目的基因的獲取40
• 2.2.3 轉移載體p Fast Bac Dual-E-M的構建40-41
• 2.2.4 轉移載體p Fast Bac Dual-E-M的初步鑒定及測序41-42
• 2.2.5 重組Bacmid的構建、提取42-44
• 2.2.6 重組Bacmid轉染Sf9昆蟲細胞44
• 2.2.7 重組桿狀病毒的分離與擴增44-45
• 2.2.8 重組蛋白在昆蟲細胞Sf9中的表達及鑒定45-46
• 2.3 結果46-51
• 2.3.1 PEDV E、M目的基因的合成46-47
• 2.3.2 轉移載體p Fast Bac Dual-E-M的鑒定47-48
• 2.3.3 重組Bacmid DNA的鑒定48-49
• 2.3.4 重組桿狀病毒的制備49-50
• 2.3.5 重組蛋白的檢測50-51
• 2.4 討論51-52
• 2.5 小結52-53
• 結論53-54
• 參考文獻54-60
• 導師及作者簡介60-61
• 致謝61

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 古洪浪;鄧勝朝;崔進;劉曉露;劉超;袁航;馬嵐;張桂紅;;豬流行性腹瀉病毒PEDV-GD12株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

2 杜曉莉;王一成;吳潤;徐麗華;袁秀芳;李軍星;周曉麗;;2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J];浙江農業(yè)學報;2014年03期

3 鄧祖麗穎;陳陸;;豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測方法的建立及應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年01期

4 李寶賢;馬廣鵬;葛俊偉;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒功能性受體的鑒定[J];病毒學報;2009年03期

5 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

6 田克恭;;兔胸水滲出病[J];上海實驗動物科學;1993年02期

7 喬憲鳳,熊忠良,華文君,鄭新民;PEDV膜蛋白基因RT-PCR最適反應條件的確立[J];湖北畜牧獸醫(yī);2001年01期

8 高慎陽;王s，

本文編號：660309