本文關鍵詞：A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表達及其純化

  更多相關文章： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核細胞 基因表達 高密度發(fā)酵 蛋白純化

【摘要】：目的原核表達A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并進行純化。方法以CPA全基因為模板,PCR擴增rCPA基因,插入表達質粒p ET-28a(+)-HSP65,構建重組表達質粒p ET-28a-rCPA-HSP65,轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達,表達產(chǎn)物進行12%SDS-PAGE分析;優(yōu)化表達工藝進行高密度發(fā)酵,發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)DEAE陰離子柱上復性后,再經(jīng)金屬螯合層析純化。結果重組表達質粒p ET-28a-rCPA-HSP65經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明構建正確,表達的重組蛋白相對分子質量約90 000,主要以可溶性形式為主,表達量占菌體總蛋白的30.17%。利用TB培養(yǎng)基,IPTG 34℃誘導5 h的表達產(chǎn)物經(jīng)純化后,純度約達95%,蛋白收率為4.5 mg/g濕菌。結論已成功表達并純化了A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,為后期疫苗生物學活性的研究奠定了基礎。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所;吉林農(nóng)業(yè)大學生命科學學院;
【關鍵詞】： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核細胞 基因表達 高密度發(fā)酵 蛋白純化
【分類號】：R378;S852.61
【正文快照】： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是該類菌中致病性較嚴重的一種,其產(chǎn)生的α毒素已被證實為最關鍵且危害最大的致病因子[1]。該菌主要通過感染人類及動物的傷口或胃腸道引起創(chuàng)傷性氣性壞疽或嚴重的食物中毒[2]。目前國內外針對產(chǎn)氣莢膜梭菌致病者尚無有效的治療方法,針對性地預防仍是關鍵[3]。

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉靜;夏春麗;李一經(jīng);;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素在干酪乳桿菌中的誘導表達及其小鼠口服免疫力[J];微生物學報;2009年08期

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10 孫佳芝;王新桐;劉雪慧;苗增民;劉志浩;王海榮;柴同杰;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用[J];中國獸醫(yī)學報;2014年06期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 林明輝;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆、表達及免疫學活性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2003年

2 孫佳芝;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及初步應用[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2014年

3 楊文靜;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白的表達及其特異性IgY抗體的制備[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

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本文編號：571222