本文關(guān)鍵詞：A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65的原核表達(dá)及其純化

  更多相關(guān)文章： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 高密度發(fā)酵 蛋白純化

【摘要】：目的原核表達(dá)A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,并進(jìn)行純化。方法以CPA全基因?yàn)槟０?PCR擴(kuò)增rCPA基因,插入表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a(+)-HSP65,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-rCPA-HSP65,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行12%SDS-PAGE分析;優(yōu)化表達(dá)工藝進(jìn)行高密度發(fā)酵,發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)DEAE陰離子柱上復(fù)性后,再經(jīng)金屬螯合層析純化。結(jié)果重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-rCPA-HSP65經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定證明構(gòu)建正確,表達(dá)的重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約90 000,主要以可溶性形式為主,表達(dá)量占菌體總蛋白的30.17%。利用TB培養(yǎng)基,IPTG 34℃誘導(dǎo)5 h的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化后,純度約達(dá)95%,蛋白收率為4.5 mg/g濕菌。結(jié)論已成功表達(dá)并純化了A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素疫苗抗原rCPA-HSP65,為后期疫苗生物學(xué)活性的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素 rCPA-HSP 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 高密度發(fā)酵 蛋白純化
【分類號(hào)】：R378;S852.61
【正文快照】： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是該類菌中致病性較嚴(yán)重的一種,其產(chǎn)生的α毒素已被證實(shí)為最關(guān)鍵且危害最大的致病因子[1]。該菌主要通過感染人類及動(dòng)物的傷口或胃腸道引起創(chuàng)傷性氣性壞疽或嚴(yán)重的食物中毒[2]。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌致病者尚無(wú)有效的治療方法,針對(duì)性地預(yù)防仍是關(guān)鍵[3]。

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李曉靜;夏春麗;李一經(jīng);;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素在干酪乳桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及其小鼠口服免疫力[J];微生物學(xué)報(bào);2009年08期

2 王俊虹;康琳;高姍;王景林;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素及其檢測(cè)[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2009年12期

3 許崇波,朱平,馬從林,石瑾琪,馮書章;抗A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立及鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1999年01期

4 許崇波;許崇利;趙志軍;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因表達(dá)及其免疫保護(hù)作用的初步研究[J];微生物學(xué)報(bào);2006年04期

5 許崇波;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素分子生物學(xué)的研究進(jìn)展[J];寧夏大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年02期

6 趙寶華,許崇波,段相林,朱平;表達(dá)抗α毒素單鏈抗體基因工程菌株的構(gòu)建[J];微生物學(xué)雜志;2002年01期

7 趙寶華,許崇波;兩種抗α毒素單鏈抗體基因的序列分析[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(bào);2001年01期

8 許崇波,朱平,姚湘燕,馬從林,馮書章;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素保護(hù)性抗原基因的高效表達(dá)[J];衛(wèi)生研究;1998年S1期

9 趙寶華,楊虹,顧為望;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素研究進(jìn)展[J];河北師范大學(xué)學(xué)報(bào);2002年05期

10 孫佳芝;王新桐;劉雪慧;苗增民;劉志浩;王海榮;柴同杰;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年06期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 林明輝;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆、表達(dá)及免疫學(xué)活性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

2 孫佳芝;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 楊文靜;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白的表達(dá)及其特異性IgY抗體的制備[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：571222