本文關(guān)鍵詞：龍勝鳳雞中一株A亞群禽白血病病毒的基因組分析及其對(duì)SPF雞的致病性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：禽白血病病毒(ALV)被發(fā)現(xiàn)已有一百多年,是最早發(fā)現(xiàn)并深入研究的病毒之一。它也是第一個(gè)被證實(shí)可誘發(fā)腫瘤的病毒,該發(fā)現(xiàn)獲得1996年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。根據(jù)ALV細(xì)胞受體的特異性和病毒基因組中囊膜蛋白基因?qū)⑵鋭澐譃锳-J等十個(gè)亞群,并由本實(shí)驗(yàn)室在我國(guó)地方品系中鑒定到一個(gè)暫名為K的新亞群。ALV-J在各種亞群中流行最為廣泛,致病性最強(qiáng),給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重影響。但流行病學(xué)調(diào)查同時(shí)表明,感染禽白血病的雞群不單單是由ALV-J引起的,也有一些感染雞群是由ALV-A、B造成的。本研究對(duì)于從我國(guó)保種的地方品系基因庫(kù)中分離鑒定到一株A亞群ALV(ALV-A),在完成其全基因分析基礎(chǔ)上對(duì)其致病性開展了系統(tǒng)研究,這有助于了解我國(guó)地方品系雞群中ALV-A的分子演變規(guī)律及其致病性,為我國(guó)地方品系中ALV凈化提供參考依據(jù)。1、龍勝鳳雞群中ALV-A的分離鑒定及其序列分析為了解中國(guó)地方品系雞中ALV的基因組序列特征及變異情況,本研究通過(guò)接種DF-1細(xì)胞、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等方法,從我國(guó)特有地方品系龍勝鳳雞某保種雞群種蛋中分離到一株ALV-A,命名為SDAU14A1。通過(guò)相互直接重疊的引物對(duì)不同基因區(qū)域進(jìn)行了擴(kuò)增和克隆測(cè)序,通過(guò)拼接獲得了其全基因組。將該序列與不同參考毒株進(jìn)行序列對(duì)比,結(jié)果顯示SDAU14A1與日本矮腳雞分離株Tyms_90全基因組同源性最高,其U3區(qū)同源性達(dá)到100%,而與其它中國(guó)地方品系雞分離株同源性較低,暗示該毒株可能代表東亞地區(qū)地方品系雞的某種特有毒株類型。該研究展示出我國(guó)地方品系雞感染ALV的多樣性,提示我們有必要實(shí)施嚴(yán)格的監(jiān)控和凈化措施,推動(dòng)我國(guó)地方品系雞中ALV的凈化。2、ALV-A分離毒株對(duì)SPF雞的致病性研究本實(shí)驗(yàn)選擇卵黃囊接種和1日齡腹腔接種兩種攻毒方式系統(tǒng)研究了SDAU14A1對(duì)SPF雞的致病作用,并同時(shí)設(shè)置了橫向傳播組和空白對(duì)照組觀察其橫向傳播能力。在1w時(shí)每只雞分別接種0.1m L NDV和AIV-H9滅活疫苗,并于免疫后3w、4w、5w采血,分離血清后以HI試驗(yàn)檢測(cè)針對(duì)NDV和AIV-H9抗體效價(jià)。第7w時(shí),各組隨機(jī)選取和剖殺6只雞稱其體重以及法氏囊、胸腺和脾臟的重量,計(jì)算免疫器官指數(shù)(免疫器官重量/體重)。對(duì)自然死亡的雞剖檢并觀察,發(fā)生腫瘤的雞將其腫瘤組織制備切片,HE染色后進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示,相對(duì)于空白對(duì)照組,病毒感染組能夠引起更為顯著的生長(zhǎng)遲緩和免疫抑制(p0.05),免疫抑制主要體現(xiàn)在攻毒實(shí)驗(yàn)組的胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著降低以及NDV和AIV-H9疫苗的抗體水平顯著降低(p0.05)。該毒株還可誘發(fā)淋巴細(xì)胞腫瘤并具有較強(qiáng)的水平傳播能力。感染組與空白對(duì)照組之間相比差異極顯著,但是兩種接種方式感染雞后免疫器官指數(shù)差異不顯著。
【關(guān)鍵詞】：地方品系雞 ALV-A 全基因組分析 致病性
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明4-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-14
• 1 前言14-32
• 1.1 禽白血病的研究進(jìn)展14-22
• 1.1.1 禽白血病的歷史與分布14-16
• 1.1.2 禽白血病臨床特征和病理變化16-18
• 1.1.2.1 臨床特征16
• 1.1.2.2 病理變化16-18
• 1.1.3 禽白血病流行病學(xué)的特征變化18-20
• 1.1.3.1 感染特性18-19
• 1.1.3.2 傳播特征19-20
• 1.1.4 禽白血病的檢測(cè)和診斷20-21
• 1.1.5 禽白血病的防制研究現(xiàn)狀21-22
• 1.2 禽白血病病毒的研究進(jìn)展22-31
• 1.2.1 禽白血病病毒的結(jié)構(gòu)與增殖23-24
• 1.2.2 禽白血病病毒的分型24-25
• 1.2.3 禽白血病病毒的基因組結(jié)構(gòu)及其功能25-29
• 1.2.4 禽白血病病毒的致腫瘤機(jī)制29-30
• 1.2.5 禽白血病病毒引起的免疫抑制30-31
• 1.3 本研究的目的及意義31-32
• 2 材料方法32-44
• 2.1 材料32-34
• 2.1.1 病料及毒株來(lái)源32
• 2.1.2 細(xì)胞32
• 2.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與SPF飼養(yǎng)設(shè)施32-33
• 2.1.4 用于同源性比較的各亞群參考株33
• 2.1.5 主要儀器和試劑33-34
• 2.1.6 試劑的配制34
• 2.2 方法34-44
• 2.2.1 病毒分離34-35
• 2.2.2 病毒的鑒定35-37
• 2.2.2.1 免疫熒光的鑒定35-36
• 2.2.2.2 斑點(diǎn)分子雜交36-37
• 2.2.3 病毒擴(kuò)增定量37
• 2.2.4 SDAU14A1株env基因的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序37-40
• 2.2.4.1 ALV前病毒DNA的制備37-38
• 2.2.4.2 擴(kuò)增ALV env基因的引物設(shè)計(jì)38
• 2.2.4.3 分離病毒env基因的擴(kuò)增、克隆與測(cè)序38-40
• 2.2.4.4 分離株gp85氨基酸序列與ALV各亞群參考株的同源性比較40
• 2.2.5 前病毒全基因組DNA的克隆測(cè)序及序列分析40-41
• 2.2.6 分離毒株對(duì)SPF雞的致病性41-44
• 2.2.6.1 實(shí)驗(yàn)分組41
• 2.2.6.2 病毒血癥的動(dòng)態(tài)檢測(cè)41
• 2.2.6.3 體重及免疫器官指數(shù)的測(cè)定41
• 2.2.6.4 NDV和AIV-H9滅活疫苗的免疫和抗體水平的測(cè)定41-42
• 2.2.6.5 血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定NDV和AIV-H9抗體滴度42-44
• 3 結(jié)果44-54
• 3.1 ALV的分離鑒定與定量44-45
• 3.2 分離毒株env基因的序列分析與亞群確定45-46
• 3.3 SDAU14A1株前病毒DNA的擴(kuò)增和序列分析46-48
• 3.4 不同感染方式下SPF雞病毒血癥動(dòng)態(tài)變化48-49
• 3.5 SDAU14A1感染對(duì)SPF雞體重的影響49-50
• 3.6 SDAU14A1感染對(duì)雞免疫功能的影響50-52
• 3.7 感染雞的發(fā)病與腫瘤情況52-54
• 4 討論54-56
• 5 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-66
• 致謝66-67
• 碩士期間發(fā)表的論文67

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