本文關(guān)鍵詞：克隆豬與人工授精豬胎盤發(fā)育的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：克隆又稱體細(xì)胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT),該技術(shù)已在多種哺乳動物中成功建立并被逐漸應(yīng)用。目前,豬的體細(xì)胞克隆仍然有很多問題,首先,豬的克隆效率不足1%;其次,超過50%的克隆仔豬在斷奶前死亡。這兩個主要問題嚴(yán)重制約著豬克隆技術(shù)的發(fā)展。胎兒的宮內(nèi)生長發(fā)育高度依賴于胎盤的形態(tài)大小和功能。很多研究表明,胎盤發(fā)育缺陷是抑制克隆胚胎生長發(fā)育的主要原因之一。但是克隆動物產(chǎn)后的高死亡率與胎盤異常的相關(guān)性研究只在個別克隆哺乳動物中有報道,目前還沒有研究報道胎盤發(fā)育狀況與克隆豬出生后存活率的關(guān)系。因此,研究掌握克隆豬胎盤的發(fā)育狀況將對改善或提高豬的克隆效率以及出生后存活率具有重要意義。本研究通過比較克隆豬與人工授精豬(Artificial insemination,AI)的胎盤相關(guān)性狀、組織形態(tài)、基因m RNA及蛋白表達(dá)水平,從而探究胎盤發(fā)育狀況與克隆豬產(chǎn)后存活率的關(guān)聯(lián)性。主要研究結(jié)果如下:(1)克隆豬的窩均產(chǎn)仔數(shù)明顯低于人工授精豬(4.5頭VS.11.8頭),克隆豬的死胎率和出生后4天內(nèi)的死亡率分別達(dá)到20.7%和51.7%。(2)出生活的克隆豬與AI豬的仔豬出生重和胎盤發(fā)育相關(guān)指標(biāo)比較顯示,S-LB組的仔豬出生重、胎盤面積、胎盤效率均顯著低于A-LB組(P0.05),而胎盤重?zé)o顯著差異;出生4天的比較分析結(jié)果顯示,S-DW4組的仔豬出生重、胎盤重、胎盤面積均顯著低于S-SO4組和A-SO4組(P0.05),但是S-SO4組和S-DW4組的胎盤效率顯著低于A-SO4組(P0.05)。(3)性狀間相關(guān)性分析可知克隆豬出生時和出生4天后的存活率均與仔豬出生重、胎盤重、胎盤面積呈極顯著的正相關(guān)(P0.01),且仔豬出生重與胎盤重、胎盤面積、胎盤效率均呈極顯著的正相關(guān)(P0.01)。(4)胎盤組織形態(tài)學(xué)檢測表明S-SO4組的胎盤發(fā)育狀況接近于AI豬,但S-DW4組的胎盤組織形態(tài)有明顯的異常,包括微絨毛數(shù)量不足、細(xì)胞滋養(yǎng)層發(fā)育異常等。臍帶形態(tài)鑒定顯示S-LB組的臍帶異常率顯著高于A-LB組(P0.05)。然而S-SO4組的臍帶異常率與A-SO4組無明顯差異,但顯著低于S-DW4組(P0.05)。(5)m RNA表達(dá)及蛋白水平檢測結(jié)果表明S-SO4組胎盤的印跡基因和非印跡基因的m RNA表達(dá)量基本上與A-SO4組無顯著差異,而S-DW4組胎盤中的這些基因的m RNA表達(dá)量出現(xiàn)顯著上調(diào)或下調(diào),且蛋白檢測分析顯示S-DW4組的Cu-Zn SOD蛋白的表達(dá)異常,暗示這類胎盤容易遭受氧化應(yīng)激,m RNA表達(dá)和蛋白表達(dá)失調(diào)導(dǎo)致胎盤的形態(tài)異常和功能受損。綜上所述,大量克隆豬出生后死亡很大程度上與仔豬出生重偏低有關(guān),胎盤的形態(tài)異常和功能缺陷是導(dǎo)致克隆豬宮內(nèi)發(fā)育不良的主要源頭。因此,改善克隆豬胎盤的發(fā)育質(zhì)量可能是提高豬克隆效率及仔豬產(chǎn)后存活率的一種途徑,出生后的克隆仔豬應(yīng)得到更多的護(hù)理和重視才能減小其死亡率。
【關(guān)鍵詞】：體細(xì)胞核移植 表觀遺傳修飾 印跡基因 胎盤異常
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 1 前言10-19
• 1.1 體細(xì)胞克隆技術(shù)概述10-13
• 1.1.1 體細(xì)胞克隆技術(shù)簡介10
• 1.1.2 體細(xì)胞克隆技術(shù)的發(fā)展歷程10-11
• 1.1.3 體細(xì)胞克隆技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域11-12
• 1.1.4 體細(xì)胞克隆技術(shù)應(yīng)用面臨的主要難題12-13
• 1.2 胎盤發(fā)育與體細(xì)胞克隆技術(shù)效率13-19
• 1.2.1 胎盤的類型及功能13-15
• 1.2.2 胎盤發(fā)育的調(diào)控機(jī)制15-16
• 1.2.3 胎盤相關(guān)性狀與產(chǎn)仔數(shù)及產(chǎn)后動物存活率的關(guān)系16-17
• 1.2.4 克隆動物胎盤發(fā)育的研究17-19
• 1.3 本研究的目的意義及主要內(nèi)容19
• 2 材料與方法19-30
• 2.1 實驗材料19-22
• 2.1.1 實驗樣本19-20
• 2.1.2 主要試劑20
• 2.1.3 主要溶液配制20
• 2.1.4 主要儀器及設(shè)備20-21
• 2.1.5 數(shù)據(jù)分析及圖片處理軟件21-22
• 2.1.6 本研究的技術(shù)路線22
• 2.2 實驗方法22-30
• 2.2.1 收集胎盤數(shù)據(jù)及樣品22-23
• 2.2.2 胎盤組織形態(tài)學(xué)觀察23-24
• 2.2.3 定量PCR檢測24-27
• 2.2.4 胎盤組織Western Blot檢測27-30
• 3 結(jié)果與分析30-42
• 3.1 克隆豬與人工授精豬出生時及出生4天后存活率的比較30
• 3.2 克隆豬與人工授精豬臍帶表型的比較30-32
• 3.3 克隆豬與人工授精豬胎盤相關(guān)性狀的比較32-33
• 3.4 克隆豬出生時和出生4天的存活率與出生重、胎盤性狀的相關(guān)性分析33-35
• 3.5 克隆豬與人工授精豬的胎盤組織形態(tài)比較35-36
• 3.6 克隆豬與人工授精豬胎盤中印跡基因和非印跡基因表達(dá)比較36-42
• 3.6.1 印跡基因的表達(dá)36-37
• 3.6.2 血管生成相關(guān)基因的表達(dá)37-38
• 3.6.3 營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)38-39
• 3.6.4 細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)39-40
• 3.6.5 氧化應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)40-42
• 4 討論42-47
• 4.1 胎盤發(fā)育異常與克隆豬出生后存活率的關(guān)系42-45
• 4.2 改善克隆豬胎盤發(fā)育效率可能的方法45-47
• 4.2.1 利用四倍體補(bǔ)償?shù)募夹g(shù)替換克隆胚胎的滋養(yǎng)層干細(xì)胞45-46
• 4.2.2 調(diào)控代孕母豬的營養(yǎng)水平46-47
• 5 結(jié)論47-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-58
• 附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：436444