剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種呈世界性分布的重要人獸共患原蟲,能感染包括人在內(nèi)的幾乎所有哺乳動物和一些鳥類,全世界約有1/3的人感染弓形蟲,嚴(yán)重危害人類和動物的生命及健康。本論文以遺傳變異研究為基礎(chǔ),分別對弓形蟲病的診斷和免疫進(jìn)行了研究。 首先,對15個弓形蟲蟲株的胚層發(fā)育相關(guān)蛋白(TgERP)基因進(jìn)行PCR引物設(shè)計(jì),并對其進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列測定,測序結(jié)果利用Puzzle5.2、Paup4.0和DNAStar5.0軟件進(jìn)行分析。結(jié)果表明,15個弓形蟲蟲株的TgERP基因包含的完整開放閱讀框(ORF)長度均為315bp,A+T含量在46.67%-46.98%之間,僅有1個堿基發(fā)生變異,變異率為0-0.32%。編碼104個氨基酸,變異率在0-0.96%之間。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,TgERP基因序列雖然能夠?qū)⒐蜗xI型蟲株與Ⅱ/Ⅲ型蟲株區(qū)分開,但卻不能區(qū)分所有基因型的蟲株。TgERP基因在各基因型蟲株中十分保守,不適合作為遺傳標(biāo)記分子來區(qū)分不同基因型的弓形蟲蟲株。研究結(jié)果為該基因編碼的蛋白在血清學(xué)診斷和疫苗防疫上的應(yīng)用價值提供理論基礎(chǔ)。 同時,以弓形蟲RH株的基因...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 弓形蟲基因分型
        1.1.1 弓形蟲基因分型常用方法
        1.1.2 弓形蟲基因分型研究中遺傳標(biāo)記的選擇
    1.2 弓形蟲病的診斷方法
        1.2.1 病原學(xué)診斷
        1.2.2 免疫學(xué)診斷
        1.2.3 分子生物學(xué)診斷
    1.3 弓形蟲病的疫苗研究
    1.4 弓形蟲的主要抗原基因
    1.5 葡萄球菌A蛋白
    1.6 弓形蟲胚層發(fā)育相關(guān)蛋白
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 弓形蟲蟲株
        2.1.2 試驗(yàn)動物
        2.1.3 質(zhì)粒和菌株
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 溶液配制
        2.1.7 培養(yǎng)基
        2.1.8 引物設(shè)計(jì)
    2.2 方法
        2.2.1 弓形蟲ERP基因的遺傳變異分析
        2.2.2 間接ELISA診斷方法建立及其初步應(yīng)用
        2.2.3 弓形蟲ERP免疫原性分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 弓形蟲ERP基因的遺傳變異分析結(jié)果
        3.1.1 TgERP基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.2 重組質(zhì)粒的鑒定結(jié)果
        3.1.3 不同弓形蟲蟲株之間TgERP基因序列的變異分析
    3.2 間接ELISA診斷方法建立及其初步應(yīng)用的結(jié)果
        3.2.1 弓形蟲RH株重組表達(dá)質(zhì)粒pET30-ERP的制備
        3.2.2 弓形蟲RH株TgERP基因的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
        3.2.3 TgERP的多克隆抗體的制備
        3.2.4 間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用
    3.3 弓形蟲ERP免疫原性分析結(jié)果
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)鼠血清中IgG抗體和IgG1、IgG2a抗體亞類的分布情況
        3.3.2 細(xì)胞因子IFN-γ、IL2、IL4、IL10和IL12p70的檢測
        3.3.3 免疫鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTS法)
        3.3.4 流式細(xì)胞分選儀分析CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-細(xì)胞
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：4039580