金黃色葡萄球菌是引發(fā)奶牛乳腺炎的主要病原菌之一,它是一種非典型的胞內(nèi)寄生菌,可以引起細(xì)胞炎癥并通過(guò)釋放多種毒素加重細(xì)胞感染,尤其是其釋放的α-溶血素,在金黃色葡萄球菌入侵奶牛乳腺組織的過(guò)程中通過(guò)破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致細(xì)胞大量死亡。許多研究發(fā)現(xiàn),通過(guò)中和作用或抑制毒力因子的分泌就能達(dá)到緩解炎癥發(fā)生,許多中藥已經(jīng)被證明具有很好的中和細(xì)菌毒素、抑制細(xì)菌毒力蛋白分泌和消除炎癥的作用。本課題通過(guò)研究苦參堿對(duì)產(chǎn)α-溶血素金黃色葡萄球菌損傷奶牛乳腺上皮細(xì)胞的干預(yù)作用,從而為研究中藥干預(yù)病原菌損傷宿主細(xì)胞的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。首先用二倍稀釋法和紫外分光光度計(jì)法測(cè)定苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌的藥物敏感性及其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響;用家兔紅細(xì)胞溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌α-溶血素活性的影響、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及Western Bloting檢測(cè)苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌分泌α-溶血素的影響;用CCK-8法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)苦參堿對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖和金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)其凋亡的影響;本課題重點(diǎn)研究苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌入侵奶牛乳腺上皮細(xì)胞的影響并確認(rèn)其發(fā)揮調(diào)控作用的通路。發(fā)現(xiàn)苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC在1.25 ...

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一金負(fù)色翻萄球翻入俊細(xì)腦栩型}81}

Ｆｉｇ?１－４?Ｃｕｒｒｅｎｔ?ｍｏｄｅｌｏｆｔｈｅ?Ｓ．?ａｕｒｅｕｓ?ｉｎｖａｓｉｏｎ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ１８５１??的多樣性以及不同分離株的潛在關(guān)鍵分子在體內(nèi)差異表達(dá)１８６１都應(yīng)該作球菌疫苗考慮之列。一個(gè)理想的免疫治療藥劑應(yīng)該能夠防止細(xì)菌粘附，消除并中和有毒的外蛋白。因此，....

圖２－２苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌ＵＳＡ３００生長(zhǎng)的影響??Ｆｉｇ?２－２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｍａｔｒｉｎｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｓ．?ａｕｒｅｕｓ?ＵＳＡ３００．??

２．３．２苦參堿影響金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果??使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)不同濃度苦參堿與金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)的ＯＤ６００?ｎｍ，繪制金黃??色葡萄球菌生長(zhǎng)曲線，如圖２－２所示，發(fā)現(xiàn)２５６?ｐｇ／ｍＬ濃度以內(nèi)的苦參堿并不會(huì)影響金黃色葡萄??球菌的生長(zhǎng)。??３?：??Ｅ?中０—....

圖２－４苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌分泌ａ－溶血素的影響??

２．３．５苦參堿對(duì)金黃色葡萄球菌ａｇｒ／Ｋ?／７／〇基因相對(duì)表達(dá)量的影響??Ｗｃｚ基因編碼ａ－溶血素的表達(dá)，ａｇｒ基因編碼的二元調(diào)控系統(tǒng)在其上游正向調(diào)控ａ－溶血素的??表達(dá)，因此通過(guò)ＲＴ－ＰＣＲ分析基因Ｗａ和ａｇｒＪ的相對(duì)表達(dá)量。由圖２－３可知，不同濃度的苦參堿作??用于金黃色葡....

圖３－ｌ苦參堿對(duì)ｂＭＥＣｓ增殖的影響??Ｆｉｇ?３－１?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｍａｔｒｉｎｅ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｂＭＥＣｓ．??

３．３結(jié)果??３．３．１苦參堿對(duì)ｂＭＥＣｓ增殖的影響作用??本試驗(yàn)用ＣＣＫ－８法測(cè)定苦參堿對(duì)ｂＭＥＣｓ增殖的作用，由圖３－１可知，１００?ｆｉｇ／ｍＬ內(nèi)的苦參??堿對(duì)ｂＭＥＣｓ均無(wú)細(xì)胞毒性，且對(duì)細(xì)胞增殖具有一定的提高作用，其中７５?ｎｇ／ｍＬ的苦參堿對(duì)細(xì)胞??活力的促進(jìn)作用最大。....

本文編號(hào)：4039294