新城疫(Newcastle disease,ND)因其高發(fā)病率和高死亡率給世界各地的家禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大威脅,接種疫苗是防控ND最有效的措施。采用傳統(tǒng)的雞胚工藝生產(chǎn)新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)疫苗,存在SPF雞胚供應(yīng)不足、質(zhì)量控制困難及規(guī)模放大受限等問題;基于細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)工藝存在成本高、操作復(fù)雜和過程控制困難等缺點(diǎn);而應(yīng)用無血清懸浮培養(yǎng)工藝雖可克服上述缺陷,但存在缺乏對NDV敏感的懸浮細(xì)胞系、適于NDV擴(kuò)增的無血清維持培養(yǎng)基及工藝不成熟等問題。針對上述問題,亟需開發(fā)基于動物細(xì)胞的NDV懸浮培養(yǎng)工藝及適于NDV增殖的無血清維持培養(yǎng)基。本文首先以實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)的無血清培養(yǎng)基SF201為生長及維持培養(yǎng)基,通過敏感細(xì)胞株篩選、病毒適應(yīng)及細(xì)胞毒種制備、病毒接種條件優(yōu)化,建立了無血清懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)NDV工藝。當(dāng)BHK-v002細(xì)胞生長至約9.0×106cells/mL時,用新鮮培養(yǎng)基將活細(xì)胞密度稀釋至6.0×106 cells/mL,在MOI為0.005、TPCK-胰酶濃度為5 μg/mL條件下接種病毒,繼續(xù)培養(yǎng)96 h后收獲病毒,收獲病毒液的血凝效價(HA效...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１新城疫病毒的結(jié)構(gòu)示意圖??Ｆｉｇ．?１．１?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＮＤＶ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｍｏｄｅｌ??

ＮＡ的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄；外部蛋白包括Ｆ、ＨＮ和Ｍ蛋白，構(gòu)成病毒的脂質(zhì)??囊膜［１８］。其中位于囊膜外表面的糖蛋白ＨＮ和Ｆ是ＮＤＶ最重要的兩個功能蛋白，分別??形成病毒囊膜表面的大、小纖突，并分別以四聚體和三聚體形式存在。其不僅是ＮＤＶ??毒力和致病性的基礎(chǔ)，也是重要的宿主保護(hù)性抗原，誘....

圖１．２新城疫病毒增殖過程示意圖⑴??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｈｅ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ＮＤＶ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｓｓ??

華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文?第５頁??１．２．３新城疫病毒增殖過程??ＮＤＶ是由核酸分子（ＲＮＡ）與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞形態(tài)的粒子，其結(jié)構(gòu)和組成簡??單，必須通過宿主細(xì)胞才能完成自身增殖。為了進(jìn)行病毒復(fù)制，感染性ＮＤＶ顆粒進(jìn)入??宿主細(xì)胞后劫持其生物合成原材料，并操縱宿主細(xì)胞細(xì)胞器，....

圖３．７稀釋比例對ＮＤＶ在ＢＨＫ－ｖ００２細(xì)胞中增殖的影響??Ａ：活細(xì)胞密度；Ｂ：血凝效價；Ｃ?

?｜－＊－｜?Ｘ??５§６－?Ｉ??＜?＜?Ｉ＇?｜?ｈｈｍ？?ｒ－Ｌ．??由￥?｜??｜２．?ｖ?獨(dú)－??Ｑ?＿?１?ｍｍｍ?ｔ?１?＿＿?？?＿＿＿?Ｉ?＿＿?ｉ?一?＂Ｌ?．＿＿＿ｊＭ．Ｍ．?Ｍ．Ｕｉ．．．???．．．．．１．．???．．．．．ｉ．．．．．．�。�?．．....

圖３．８?ＮＤＶ致ＢＨＫ－Ｖ００２細(xì)胞病變結(jié)果??－

第２８頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??釋細(xì)胞培養(yǎng)液，稀釋后檢測活細(xì)胞密度為６．３ｘｌ〇６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ。接種病毒后，２４ｈｐｉ達(dá)到最??大活細(xì)胞密度，此后逐漸下降，至１４４ｈ培養(yǎng)結(jié)束。ＴＣＩＤ５Ｇ在９６ｈ，即４８ｈｐｉ達(dá)最大值，??為７．９１ｏｇ１（）ＴＣＩＤ５（）／ｍＬ。病毒....

本文編號：4031113