mcr-1是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種多粘菌素耐藥基因,該基因可隨質(zhì)粒在不同菌株間快速傳播,目前已在多個(gè)國家及地區(qū)被檢出,本研究團(tuán)隊(duì)前期篩選發(fā)現(xiàn)聯(lián)合使用綿馬酚與多粘菌素時(shí)可以抑制mcr-1陽性大腸桿菌的生長。為了評價(jià)兩者聯(lián)合使用時(shí)的抑菌效果,本研究采用棋盤稀釋法對mcr-1陽性大腸桿菌進(jìn)行了綿馬酚與多粘菌素聯(lián)合藥敏實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,當(dāng)聯(lián)合使用綿馬酚與多粘菌素時(shí)相比單獨(dú)使用多粘菌素時(shí),多粘菌素的MIC由8μg/m L降低至1μg/m L,FIC指數(shù)小于0.5,二者屬于協(xié)同作用。以終濃度為32μg/m L綿馬酚與10μg/m L多粘菌素聯(lián)合使用,進(jìn)一步通過平板計(jì)數(shù)和透射電鏡檢測其殺菌效果和大腸桿菌菌體的破損程度,結(jié)果顯示,當(dāng)聯(lián)合使用綿馬酚與多粘菌素時(shí),大腸桿菌在2 h～8 h逐漸全部死亡,大腸桿菌菌體破損最嚴(yán)重;但不管是單獨(dú)使用綿馬酚還是多粘菌素,大腸桿菌均不能被徹底殺滅。采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法分別提取mcr-1陽性大腸桿菌JD08菌株和含有16μg/m L的綿馬酚的mcr-1陽性大腸桿菌JD08菌株中類脂A,利用質(zhì)譜儀檢測類脂A的結(jié)構(gòu),結(jié)果顯示在綿馬酚存在的情況下,MCR-1蛋白的作用受到抑...

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圖6 Biacore測定綿馬酚與MCR-1蛋白之間相互作用力

圖5重組蛋白MCR-1的SDS-PAGE檢測3討論

圖1 綿馬酚聯(lián)合多粘菌素對mcr-1陽性大腸桿菌的殺菌曲線

通過電鏡觀察正常培養(yǎng)的JD08菌株、10μg/mL多粘菌素作用的JD08菌株及10μg/mL多粘菌素+32μg/mL綿馬酚的作用的JD08菌株，結(jié)果顯示mcr-1陽性大腸桿菌JD08菌體形態(tài)較好，外膜完整，僅有輕微形變，可能是制作切片過程中的損傷（圖2A);10μg/mL的多....

圖2 透射電鏡觀察mcr-1陽性大腸桿菌JD08形態(tài)

采用氯仿/甲醇/水混合相萃取法提取類脂A，如圖3A所示，在mcr-1陽性大腸桿菌JD08中分離出的類脂大小為1920.3U，相比于未經(jīng)修飾的正常的類脂A(1797.1U）增加了大約123U。而如圖3B所示，在綿馬酚存在的情況下，MCR-1蛋白的作用受到抑制，發(fā)生轉(zhuǎn)移的酰....

圖3 質(zhì)譜檢測JD08菌株中類脂A的變化情況

圖2透射電鏡觀察mcr-1陽性大腸桿菌JD08形態(tài)2.5MCR-1蛋白的表達(dá)與純化結(jié)果

本文編號：4017137