畜禽遺傳資源是我國的寶貴財(cái)富,是畜牧行業(yè)相當(dāng)重要的生產(chǎn)資料,遺傳資源的保護(hù)與保存對于促進(jìn)畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,保證自然界物種多樣性以及遺傳多態(tài)性具有重要的意義,利用儲存干細(xì)胞的方法保存遺傳資源,也是為畜禽遺傳資源的保護(hù)和利用開辟了新思路。本實(shí)驗(yàn)以禽類間充質(zhì)干細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,對間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行了分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性分析和多向分化潛能的研究。畜禽的脂肪細(xì)胞分化過程是由間充質(zhì)干細(xì)胞分化為前脂肪細(xì)胞,再分化為脂肪細(xì)胞。本文通過對Wnt/β-catenin信號通路在肉雞脂肪干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)過程中的作用做了分析,得到以下結(jié)果:1.利用Ⅰ型膠原酶分離肉雞脂肪干細(xì)胞(ADSCs),培養(yǎng)形態(tài)呈長梭形,是典型的間充質(zhì)細(xì)胞的形態(tài),在體外條件培養(yǎng)了28代。繪制P3、P15和P25肉雞ADSCs的生長曲線檢測其增殖的能力,共經(jīng)歷了潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期以及衰亡期,呈典型的“S”形生長,隨著代次的升高,細(xì)胞的增殖能力逐漸減弱。同樣,細(xì)胞克隆形成能力實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,肉雞ADSCs具有自我更新能力,但隨著代次的增高,自我更新能力將會減弱。利用RT-PCR和免疫熒光檢測細(xì)胞的表面標(biāo)記物,再通過流式細(xì)胞儀分析其表面標(biāo)記物...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 我國畜禽遺傳資源現(xiàn)狀
    1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)研究
        1.2.1 干細(xì)胞及其分類
        1.2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞及其表面抗原的表達(dá)
        1.2.3 間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)
        1.2.4 間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能
        1.2.5 間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化潛能
    1.3 脂肪干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.4 真皮間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.5 Wnt信號通路的研究進(jìn)展及其對脂肪細(xì)胞形成的影響
        1.5.1 Wnt/β-catenin通路介紹
        1.5.2 Wnt/β-catenin通路在脂肪細(xì)胞分化中的作用
    1.6 研究的目的和意義
第二章 肉雞脂肪干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及生物學(xué)特性的研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要的試劑及配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要的設(shè)備及儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 肉雞ADSCs分離與培養(yǎng)
        2.2.2 肉雞ADSCs生物學(xué)特性鑒定
        2.2.3 肉雞ADSCs三向分化潛能的研究
        2.2.4 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 肉雞ADSCs形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.2 肉雞ADSCs生長曲線的繪制
        2.3.3 肉雞ADSCs克隆形成能力檢測
        2.3.4 肉雞ADSCs的 RT-PCR檢測
        2.3.5 肉雞ADSCs的免疫熒光檢測
        2.3.6 肉雞ADSCs的表面標(biāo)記物陽性率檢測
        2.3.7 肉雞ADSCs的誘導(dǎo)分化能力的檢測
    2.4 討論
第三章 鵝真皮間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及生物學(xué)特性的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)主要的試劑及配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)主要的設(shè)備及儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 鵝DMSCs分離與培養(yǎng)
        3.2.2 鵝DMSCs生物學(xué)特性鑒定
        3.2.3 鵝DMSCs三向分化潛能的研究
        3.2.4 鵝DMSCs與肉雞ADSCs成脂分化能力的比對
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 鵝DMSCs形態(tài)學(xué)觀察
        3.3.2 鵝DMSCs生長曲線的繪制
        3.3.3 鵝DMSCs克隆形成能力的檢測
        3.3.4 鵝DMSCs的 RT-PCR檢測
        3.3.5 鵝DMSCs的免疫熒光檢測
        3.3.6 流式細(xì)胞術(shù)分析鵝DMSCs標(biāo)記物陽性率
        3.3.7 鵝DMSCs的誘導(dǎo)分化及鑒定
        3.3.8 鵝DMSCs與肉雞ADSCs成脂分化能力的比對
    3.4 討論
第四章 Wnt信號通路在禽類干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化的作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)主要的試劑及配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)主要的設(shè)備及儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 Wnt/β-catenin信號通路各因子的蛋白表達(dá)量
        4.2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及油紅O染色結(jié)果
        4.2.3 成脂分化過程PPARγ和C/EBPα的基因表達(dá)量
        4.2.4 成脂分化過程C/EBPα蛋白的表達(dá)
        4.2.5 成脂分化過程PPARγ蛋白的表達(dá)
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：4015863