畜禽遺傳資源是我國的寶貴財富,是畜牧行業(yè)相當重要的生產(chǎn)資料,遺傳資源的保護與保存對于促進畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,保證自然界物種多樣性以及遺傳多態(tài)性具有重要的意義,利用儲存干細胞的方法保存遺傳資源,也是為畜禽遺傳資源的保護和利用開辟了新思路。本實驗以禽類間充質干細胞為實驗材料,對間充質干細胞進行了分離、培養(yǎng)及生物學特性分析和多向分化潛能的研究。畜禽的脂肪細胞分化過程是由間充質干細胞分化為前脂肪細胞,再分化為脂肪細胞。本文通過對Wnt/β-catenin信號通路在肉雞脂肪干細胞向脂肪細胞誘導過程中的作用做了分析,得到以下結果:1.利用Ⅰ型膠原酶分離肉雞脂肪干細胞(ADSCs),培養(yǎng)形態(tài)呈長梭形,是典型的間充質細胞的形態(tài),在體外條件培養(yǎng)了28代。繪制P3、P15和P25肉雞ADSCs的生長曲線檢測其增殖的能力,共經(jīng)歷了潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期以及衰亡期,呈典型的“S”形生長,隨著代次的升高,細胞的增殖能力逐漸減弱。同樣,細胞克隆形成能力實驗結果表明,肉雞ADSCs具有自我更新能力,但隨著代次的增高,自我更新能力將會減弱。利用RT-PCR和免疫熒光檢測細胞的表面標記物,再通過流式細胞儀分析其表面標記物...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 我國畜禽遺傳資源現(xiàn)狀
    1.2 間充質干細胞相關研究
        1.2.1 干細胞及其分類
        1.2.2 間充質干細胞及其表面抗原的表達
        1.2.3 間充質干細胞的形態(tài)
        1.2.4 間充質干細胞的免疫調節(jié)功能
        1.2.5 間充質干細胞的多向分化潛能
    1.3 脂肪干細胞的研究進展
    1.4 真皮間充質干細胞的研究進展
    1.5 Wnt信號通路的研究進展及其對脂肪細胞形成的影響
        1.5.1 Wnt/β-catenin通路介紹
        1.5.2 Wnt/β-catenin通路在脂肪細胞分化中的作用
    1.6 研究的目的和意義
第二章 肉雞脂肪干細胞的分離、培養(yǎng)以及生物學特性的研究
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗主要的試劑及配制
        2.1.3 實驗主要的設備及儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 肉雞ADSCs分離與培養(yǎng)
        2.2.2 肉雞ADSCs生物學特性鑒定
        2.2.3 肉雞ADSCs三向分化潛能的研究
        2.2.4 統(tǒng)計方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 肉雞ADSCs形態(tài)學觀察
        2.3.2 肉雞ADSCs生長曲線的繪制
        2.3.3 肉雞ADSCs克隆形成能力檢測
        2.3.4 肉雞ADSCs的 RT-PCR檢測
        2.3.5 肉雞ADSCs的免疫熒光檢測
        2.3.6 肉雞ADSCs的表面標記物陽性率檢測
        2.3.7 肉雞ADSCs的誘導分化能力的檢測
    2.4 討論
第三章 鵝真皮間充質干細胞的分離、培養(yǎng)以及生物學特性的研究
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗主要的試劑及配制
        3.1.3 實驗主要的設備及儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 鵝DMSCs分離與培養(yǎng)
        3.2.2 鵝DMSCs生物學特性鑒定
        3.2.3 鵝DMSCs三向分化潛能的研究
        3.2.4 鵝DMSCs與肉雞ADSCs成脂分化能力的比對
    3.3 實驗結果
        3.3.1 鵝DMSCs形態(tài)學觀察
        3.3.2 鵝DMSCs生長曲線的繪制
        3.3.3 鵝DMSCs克隆形成能力的檢測
        3.3.4 鵝DMSCs的 RT-PCR檢測
        3.3.5 鵝DMSCs的免疫熒光檢測
        3.3.6 流式細胞術分析鵝DMSCs標記物陽性率
        3.3.7 鵝DMSCs的誘導分化及鑒定
        3.3.8 鵝DMSCs與肉雞ADSCs成脂分化能力的比對
    3.4 討論
第四章 Wnt信號通路在禽類干細胞向脂肪細胞分化的作用
    4.1 實驗材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗主要的試劑及配制
        4.1.3 實驗主要的設備及儀器
        4.1.4 實驗方法
    4.2 實驗結果
        4.2.1 Wnt/β-catenin信號通路各因子的蛋白表達量
        4.2.2 細胞形態(tài)學觀察以及油紅O染色結果
        4.2.3 成脂分化過程PPARγ和C/EBPα的基因表達量
        4.2.4 成脂分化過程C/EBPα蛋白的表達
        4.2.5 成脂分化過程PPARγ蛋白的表達
    4.3 討論
第五章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：4015863