纖毛是一種以細(xì)胞微管為主形成的突出于細(xì)胞表面的毛發(fā)狀結(jié)構(gòu),是一種非常保守細(xì)胞器官,原生生物到哺乳動物的細(xì)胞都觀察到纖毛,纖毛哺乳動物體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞廣泛存在。近年來研究發(fā)現(xiàn),很多人類疾病都與纖毛形成障礙相關(guān),纖毛結(jié)構(gòu)、長度的失調(diào)會導(dǎo)致疾病的發(fā)生,這種由于纖毛形成障礙導(dǎo)致的病變,統(tǒng)稱為纖毛病變,目前報道的纖毛病變包括Joubert綜合征,Meckel綜合征,Bardet-Biedl綜合征,腎消耗病和多囊腎綜合征等。纖毛病變的患者常常出現(xiàn)多個癥狀,例如內(nèi)臟轉(zhuǎn)位,生殖能力降低,多指(趾),視覺、聽覺、嗅覺的減退,腦發(fā)育異常等,肝腎的多囊性增生,呼吸系統(tǒng)感染,這些癥狀出現(xiàn)的比率不一并且搭配也不一致。研究發(fā)現(xiàn)纖毛除了提供流體推動力參與細(xì)胞的運(yùn)動功能之外,還具有信號傳導(dǎo)的功能,它參與調(diào)控細(xì)胞生理活動、增殖與分化以及動物個體發(fā)育。因此,深入地探索纖毛調(diào)控機(jī)理對基礎(chǔ)生物學(xué)理論的發(fā)展和人類纖毛病變相關(guān)疾病的攻克有重要意義。基因敲除技術(shù)為纖毛調(diào)控機(jī)制及基因相關(guān)表型的研究提供了有力的技術(shù)支持。 Cep164是中心體激活元件Cep家族一員,Moumita Chaki發(fā)現(xiàn)Cep164基因在纖毛相關(guān)腎消耗病患者中...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 纖毛
        1.1.1 纖毛的基本結(jié)構(gòu)
        1.1.2 纖毛的形成
        1.1.3 纖毛形成的分子機(jī)制
        1.1.4 纖毛的功能
    1.2 纖毛病變
        1.2.1 Joubert綜合征
        1.2.2 Meckel綜合征
        1.2.3 Alstrom綜合征
        1.2.4 Oro-Facial-Digital綜合征
        1.2.5 Bardet-Biedl綜合征
        1.2.6 McKusick-Kaufman
        1.2.7 Jeune Asphyxiating Thoracic Dystrophy
        1.2.8 Ellis-van Creveld/Short-Rib Polydactyy/Chondro Ectodermal Dysplasia
        1.2.9 Cranioectodermal Dysplasia/Sensenbrenner綜合征
        1.2.10 青春期腎耗病
        1.2.11 多囊腎疾病
    1.3 纖毛與Sonic Hedgehog信號
        1.3.1 Sonic Hedgehog信號通路
        1.3.2 纖毛與Hedgehog信號通路的關(guān)系
    1.4 纖毛與頭部的發(fā)育關(guān)系
    1.5 基因打靶技術(shù)
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 主要試劑與材料
        2.1.3 主要溶液及其配制方法
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 Cep164基因敲除鼠的構(gòu)建
        2.2.2 Cep164基因缺失鼠基因型分析
        2.2.3 Cep164基因敲除鼠表觀遺傳學(xué)分析
        2.2.4 Cep164基因?qū)π∈笈咛ダw毛,中心體及其附屬蛋白的影響
        2.2.5 免疫共沉淀法檢測Cep164與CP110蛋白的關(guān)系
        2.2.6 Cep164基因缺失對Hedgehog信號通路調(diào)控的影響
        2.2.7 Cep164基因?qū)π∈箢^部的發(fā)育的影響
        2.2.8 Cep164基因?qū)ε咛ゼ?xì)胞增殖與凋亡的影響
        2.2.9 Cep164基因與DNA修復(fù)的關(guān)系
        2.2.10 外源性過表達(dá)Cep164對細(xì)胞Cep164功能的影響
3 結(jié)果與分析
    3.1 Cep164基因敲除鼠
        3.1.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.2 ES細(xì)胞陽性克隆篩選
        3.1.3 Cep164基因突變對胚胎早期發(fā)育是致命性的
    3.2 Cep164基因?qū)ε咛グl(fā)育的影響
    3.3 Cep164基因敲除阻礙纖毛形成
        3.3.1 Cep164基因在細(xì)胞循環(huán)中的表達(dá)規(guī)律及與其在纖毛形成時期的位置
        3.3.2 Cep164基因?qū)w毛形成的影響
        3.3.3 Cep164基因?qū)w毛形成的appendages的影響
        3.3.4 Cep164基因敲除對細(xì)胞極性的影響
    3.4 Cep164基因?qū)π∈笈咛edgehog信號通路的影響
        3.4.1 Cep164^-/-胚胎神經(jīng)管Pax6.0的表達(dá)范圍向腹側(cè)擴(kuò)張
        3.4.2 Glil和Ptch1在Cep164^-/-胚胎中表達(dá)消失
        3.4.3 Cep164^-/-胚胎無Ptch-Lacz表達(dá)
        3.4.4 Cep164^-/-胚胎中Gli3的表達(dá)分析
    3.5 Cep164^-/-胚胎前腦發(fā)育異常
    3.6 Cep164基因缺失阻礙DNA修復(fù)過程
    3.7 Cep164基因影響細(xì)胞增殖及凋亡
    3.8 過表達(dá)Cep164基因影響Cep164基因功能
4 討論
    4.1 Cep164基因敲除
    4.2 Cep164基因敲除小鼠胚胎表型
    4.3 Cep164基因敲除參與纖毛形成
    4.4 Cep164基因敲除小鼠胚胎Hedgehog信號通路失常
    4.5 Cep164基因與頭部發(fā)育
    4.6 Cep164基因參與DNA修復(fù)過程
    4.7 外源性過表達(dá)Cep164基因抑制細(xì)胞內(nèi)源Cep164基因功能
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：4014632