本文關(guān)鍵詞：APS對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在動(dòng)物胚胎工程技術(shù)以及動(dòng)物核移植技術(shù)中,卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)是此中非常關(guān)鍵的步驟,提高卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)的技術(shù)對(duì)于提高動(dòng)物胚胎生產(chǎn)應(yīng)用以及促進(jìn)輔助生殖技術(shù)發(fā)展具有重要意見。另外,隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,也帶來了一系列問題,環(huán)境污染,生活工作壓力增大,導(dǎo)致越來越多的人面對(duì)生殖障礙。卵母細(xì)胞氧化應(yīng)激,活性氧的積累,卵母細(xì)胞胞質(zhì)顏色加深加重,使得受精成功率大大降低。因此,提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量變得越來越重要。黃芪多糖(Atragalus polysaccharides,APS)具有悠久的應(yīng)用歷史,它在抗炎、抗氧化、清除自由基方面有顯著地作用。但在卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中有怎樣的效果目前還不甚明了。此外,獸醫(yī)臨床用藥中,黃芪注射液經(jīng)常作為一種免疫增強(qiáng)劑與抗生素類藥物聯(lián)合用藥,黃芪藥物在使用過程中對(duì)于母畜的繁殖性能有無影響,也是一個(gè)需要我們關(guān)注的問題。本研究旨在探究APS在卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中的影響及其機(jī)制。采集未成熟小鼠卵母細(xì)胞添加APS(control組、0.1 mg/ml組、1.0 mg/ml組、10 mg/ml組)進(jìn)行體外成熟(In vitro maturation,IVM)培養(yǎng),統(tǒng)計(jì)卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)發(fā)生率以及第一極體(first polarbody,PB1)排出率,并通過JC-1染色方式進(jìn)行卵母細(xì)胞線粒體膜電位的檢測(cè);為了進(jìn)一步探究APS對(duì)氧化損傷的小鼠卵母細(xì)胞體外成熟過程中的作用,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步在卵母細(xì)胞培養(yǎng)液中添加丙酮醛(Methylglyoxal,MG,已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,利用化學(xué)試劑MG可以構(gòu)建卵母細(xì)胞氧化損傷模型,使得細(xì)胞內(nèi)活性氧含量增加)與APS共培養(yǎng),統(tǒng)計(jì)GVBD發(fā)生率及PB1排出率,接著檢測(cè)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生情況,綜合研究APS在小鼠卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)及體外成熟中的作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)在小鼠卵母細(xì)胞體外成熟過程中添加APS,對(duì)卵母細(xì)胞的體外成熟率,包含GVBD發(fā)生率和PB1排出率均無顯著影響。(2)線粒體膜電位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各APS濃度組間也沒有顯著差別,而實(shí)驗(yàn)組的線粒體膜電位相比對(duì)照組有輕微降低。(3)添加APS與MG造成氧化損傷的卵母細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)果顯示,APS(10 mg/mL)+MG實(shí)驗(yàn)組PB1排出率顯著降低,相應(yīng)的卵母細(xì)胞ROS產(chǎn)生量顯著升高,對(duì)GVBD發(fā)生率則沒有顯著影響。這一結(jié)果也表明,APS在臨床使用過程中對(duì)于母畜的繁殖性能是安全的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:小鼠卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中添加APS,對(duì)其體外成熟率并沒有顯著的影響。添加MG與APS共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)APS(10 mg/mL)與MG共培養(yǎng)后PB1排出率顯著降低,相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯升高。
【關(guān)鍵詞】：小鼠卵母細(xì)胞 APS 體外培養(yǎng) 氧化損傷
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814
【目錄】：

• 摘要5-7
• abstract7-11
• 文獻(xiàn)綜述11-18
• 第一章 卵母細(xì)胞體外成熟11-15
• 1.1 卵子的發(fā)生11-13
• 1.2 卵母細(xì)胞體外成熟研究進(jìn)展13-15
• 第二章 APS研究進(jìn)展15-18
• 2.1 黃芪概述15
• 2.2 APS研究概述15-18
• 2.2.1 抗炎活性15-16
• 2.2.2 免疫調(diào)節(jié)活性16
• 2.2.3 抗腫瘤活性16-17
• 2.2.4 抗氧化活性17-18
• 試驗(yàn)研究18-33
• 第三章 添加APS對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響18-27
• 3.1 材料與方法18-20
• 3.1.1 儀器設(shè)備18-19
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料19
• 3.1.3.方法19-20
• 3.2 結(jié)果與分析20-25
• 3.2.1 DPPH自由基清除測(cè)定20-22
• 3.2.2 不同濃度APS對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟的作用22-24
• 3.2.3 APS對(duì)卵母細(xì)胞線粒體膜電位的影響24-25
• 3.3 討論25-26
• 3.4 結(jié)論26-27
• 第四章 APS的抗氧化性及其對(duì)氧化損傷的卵母細(xì)胞體外成熟的影響27-32
• 4.1 材料與方法27-29
• 4.1.1 儀器設(shè)備27-28
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料28
• 4.1.3 方法28-29
• 4.2 結(jié)果與分析29-31
• 4.2.1 MG和APS對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟的影響29-30
• 4.2.2 MG和APS對(duì)卵母細(xì)胞ROS水平的影響30-31
• 4.3 討論31
• 4.4 結(jié)論31-32
• 第五章 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-40
• 致謝40-41
• 作者簡(jiǎn)介41

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