本文關(guān)鍵詞：O型FMD固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA及雙抗夾心ELISA方法的建立與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是引起偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病,嚴(yán)重影響世界畜牧業(yè)的發(fā)展。發(fā)達(dá)國(guó)家防控FMD主要是捕殺感染動(dòng)物,我國(guó)對(duì)FMD的防控措施主要是疫苗免疫,FMD的快速診斷對(duì)FMD的防控至關(guān)重要。為了能快速特異性診斷FMD,本研究制備到O型FMDV的單克隆抗體,通過(guò)大量制備腹水,并將抗體純化和標(biāo)記HRP,命名為2B5-HRP。應(yīng)用2B5-HRP建立固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA(SPCE)檢測(cè)方法,結(jié)果表明,成功制備到針對(duì)O型FMDV的特異性單抗,SPCE檢測(cè)血清的最佳稀釋度為1:8,PI=40為反應(yīng)的臨界值。敏感性和特異性是評(píng)價(jià)診斷方法的重要指標(biāo),用180份FMD陽(yáng)性血清檢測(cè)SPCE的敏感性,其中176份為陽(yáng)性,敏感性為97.8%。特異性試驗(yàn)檢測(cè)273份FMD陰性血清,其中268份為陰性,特異性為98.2%。SPCE與LPB-ELISA、VDPro及PrioCHECK的符合率均高于95%。批內(nèi)和批間重復(fù)試驗(yàn)良好,SPCE和LPB-ELISA檢測(cè)免疫動(dòng)物抗體水平基本相符。本試驗(yàn)建立的SPCE方法的敏感性和特異性較好,能特異性診斷O型FMD,可用于FMD的規(guī)模化檢測(cè),為FMD的流行病學(xué)調(diào)查提供了新的手段。為了建立快速特異性檢測(cè)O型FMDV方法,本研究以O(shè)型兔抗為包被抗原,以單抗2B5-HRP的檢測(cè)抗體建立了雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法。特異性結(jié)果顯示,建立的ELISA方法與豬水皰病病毒、A型和Asia-I型FMDV均無(wú)交叉性反應(yīng)。敏感性結(jié)果與rRT-PCR檢測(cè)結(jié)果相符,批內(nèi)和批間重復(fù)性好。本試驗(yàn)建立的雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法可用O型FMDV的檢測(cè),為FMDV的流行病學(xué)調(diào)查和控制提供了技術(shù)手段。
【關(guān)鍵詞】：單克隆抗體 固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA 雙抗夾心ELISA 特異性 敏感性
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S855.3
【目錄】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-6
• 縮略語(yǔ)表6-7
• 第一章 緒論7-18
• 1 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展8-18
• 1.1 口蹄疫及其危害8
• 1.2 FMDV的結(jié)構(gòu)8-9
• 1.3 口蹄疫檢測(cè)方法9-13
• 1.4 FMD的預(yù)防13-16
• 1.5 單克隆抗體16-18
• 第二章 O型口蹄疫單克隆抗體的制備、純化及HRP的標(biāo)記18-26
• 1 材料18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、抗原及細(xì)胞18
• 1.2 主要試劑18
• 1.3 主要儀器18
• 2 方法18-22
• 2.1 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇19
• 2.2 單克隆抗體的大量制備19
• 2.3 腹水特異性的檢測(cè)19-20
• 2.4 腹水的純化20
• 2.5 2B5單抗抗原譜分析20-21
• 2.6 HRP標(biāo)記純化的McAb21
• 2.7 標(biāo)記后McAb特異性及效價(jià)的檢測(cè)21-22
• 3 結(jié)果22-25
• 3.1 檢測(cè)腹水特異性結(jié)果22-23
• 3.2 2B5抗原譜分析23
• 3.3 純化后 2B5單抗的SDS-PAGE分析23-25
• 4 討論25-26
• 第三章 2B5單抗競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立26-38
• 1 材料26-27
• 1.1 血清26
• 1.2 相關(guān)試劑盒26
• 1.3 主要試劑26
• 1.4 主要儀器26-27
• 2 方法27-29
• 2.1 兔抗的制備27
• 2.2 試劑的最佳使用濃度的滴定27-28
• 2.3 固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA的操作步驟28
• 2.4 O型液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟28-29
• 2.5 VDPro~® FMDV Type O ELISA試劑盒操作步驟29
• 2.6 PrioCHECK~® FMDV type O試劑盒操作步驟29
• 3 結(jié)果29-35
• 3.1 各試劑最佳使用濃度的確定29-30
• 3.2 SPCE臨界值的確定30-31
• 3.3 SPCE的重復(fù)性31-32
• 3.4 固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)的符合率32-33
• 3.5 固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA的特異性33
• 3.6 SPCE測(cè)定口蹄疫抗體33-35
• 4 討論35-38
• 第四章 雙抗夾心ELISA方法的建立38-43
• 1 材料38
• 1.1 組織液38
• 1.2 主要試劑38
• 2 方法38-39
• 2.1 雙抗夾心ELISA操作流程38-39
• 2.2 篩選封閉液39
• 2.3 雙抗夾心ELISA判定標(biāo)準(zhǔn)的確定39
• 3 結(jié)果39-41
• 3.1 篩選封閉液39-40
• 3.2 雙抗夾心ELISA各試劑最佳稀釋度的確定40
• 3.3 特異性試驗(yàn)40
• 3.4 敏感性試驗(yàn)40
• 3.5 重復(fù)性試驗(yàn)40-41
• 3.6 雙抗夾心 ELISA 與 rRT-PCR 的符合率41
• 4 討論41-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50
• 作者簡(jiǎn)介50-51
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介51-52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張少東;張娟敏;杜愛(ài)芳;;豬瘟(HC)、口蹄疫(FMD)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫的效果分析[J];浙江畜牧獸醫(yī);2012年04期

2 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 高艷華;王麗君;張燕紅;左小平;張立華;孫艷琪;陳九連;盧永干;;病毒克隆技術(shù)在FMD疫苗種毒AKT03選育上的應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第六屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 石正旺;O型FMD固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA及雙抗夾心ELISA方法的建立與應(yīng)用[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 張曉寧;冠心病患者冠脈病變與Cys-C、Hcy、FMD水平的相關(guān)性研究[D];青海大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：O型FMD固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA及雙抗夾心ELISA方法的建立與應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：397290