綠色氣球菌(Aerococcus viridans)為革蘭氏陽(yáng)性球菌,是一種重要的人畜共患病原菌,在環(huán)境中普遍存在,可以引起人和動(dòng)物的多種感染甚至死亡。在獸醫(yī)臨床上,綠色氣球菌可引起豬的腦膜炎、肺炎、尿路感染和關(guān)節(jié)炎等,此外,該菌還可引起牛臨床和亞臨床乳腺炎。但由于該菌與腸球菌和鏈球菌的形態(tài)及生化特征很相似,所以前期綠色氣球菌多被誤判為這兩種細(xì)菌。近年來(lái),由于鑒定方法的完善,越來(lái)越多的綠色氣球菌被分離鑒定,且由于抗生素的長(zhǎng)期不規(guī)范使用導(dǎo)致耐藥菌株的不斷出現(xiàn),使該菌引起感染的治療難度不斷加大。噬菌體能夠特異性的感染并殺死細(xì)菌,因此可作為細(xì)菌(特別是耐藥性細(xì)菌)感染治療的候選藥物。噬菌體療法是一種十分有前景的可以輔助甚至替代抗生素的候選療法。目前,綠色氣球菌感染的控制仍是以抗生素為主,尚未見(jiàn)其噬菌體及其用于感染治療的相關(guān)報(bào)道。本研究首先從臨床發(fā)病的豬場(chǎng)及奶牛場(chǎng)等分離并鑒定了14株綠色氣球菌。以綠色氣球菌AV-X1作為宿主菌,從污水中分離到首個(gè)感染綠色氣球菌的噬菌體,并按照標(biāo)準(zhǔn)命名法將其命名為vB_AviM_AVP(簡(jiǎn)稱AVP)。對(duì)其基本生物學(xué)特性做進(jìn)...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.3細(xì)菌對(duì)裂解酶AVPL的抗性

結(jié)果（圖3.3）表明,連續(xù)傳代7代后,宿主菌仍對(duì)AVPL保持敏感性（P>0.05）,表明連續(xù)傳代7代細(xì)菌不會(huì)對(duì)AVPL產(chǎn)生抗性。3.3.4AVPL在牛奶中的活性

圖3.4裂解酶AVPL在牛奶中活性的測(cè)定

選用一株牛乳腺炎分離株測(cè)定了裂解酶AVPL在巴氏殺菌牛奶中的裂解活性。結(jié)果如圖3.4所示,AVPL在牛奶中具有很好的殺菌活性,不受牛奶中物質(zhì)的影響,終濃度12.5μg/mL的AVPL即可使2×106CFU的菌在3h內(nèi)全部裂解,這體現(xiàn)了AVPL高效的裂解活性。3.3.5A....

圖3.5AVPL的催化域與LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)比對(duì)（A）和AVPL的催化域3D結(jié)構(gòu)示意圖（B）

通過(guò)與PDB中已公布結(jié)構(gòu)的蛋白進(jìn)行比對(duì)分析,表明AVPL的催化區(qū)與金黃色葡萄球菌裂解酶LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域雖然氨基酸序列差異較大,但在3D結(jié)構(gòu)上高度相似。因此以LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域的3D結(jié)構(gòu)為模板,利用Phyre2軟件預(yù)測(cè)得到了置信度為100%的A....

圖3.6AVPL催化域和LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域的序列比對(duì)

為了確定AVPL催化域的關(guān)鍵作用位點(diǎn),將AVPL和LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)和分析。結(jié)果顯示38%的AVPL序列（主要是催化區(qū)）和LysGH15的Amidase結(jié)構(gòu)域的序列同源性較高（見(jiàn)圖3.6）。并根據(jù)Amidase的活性位點(diǎn),預(yù)測(cè)99E、159H....

本文編號(hào)：3962852