家禽細菌感染性疾病防治過程中常需使用抗菌藥物,而殺菌型抗菌藥往往誘導(dǎo)革蘭氏陰性菌釋放內(nèi)毒素。內(nèi)毒素、抗菌藥物皆可誘發(fā)肝損傷,二者共同刺激致肝損傷的病理演變規(guī)律及藥物修復(fù)機理亟待探明。本文在內(nèi)毒素、恩諾沙星單獨誘發(fā)雞肝細胞損傷基礎(chǔ)上,建立內(nèi)毒素與恩諾沙星聯(lián)合誘發(fā)新型復(fù)合式肝細胞損傷模型,并藉此研究其病理發(fā)生發(fā)展及復(fù)方甘草酸單胺的保護作用及機理。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1雞肝細胞分離及原代培養(yǎng)方法的建立采用半原位兩步灌流法,對40-50日齡的海藍公雞進行肝細胞分離,臺盼藍拒染法計算肝細胞存活率和細胞總數(shù)。肝細胞以5×105 cell/ml接種于6孔細胞培養(yǎng)板,每孔3ml,含10%胎牛血清Williams’ medium E培養(yǎng)基中,CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。觀察細胞形態(tài),測定不同培養(yǎng)階段細胞培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活力。結(jié)果顯示,肝細胞存活率≥95%,肝細胞產(chǎn)量為(4.1±0.2)×108cell/肝；培養(yǎng)48 h至144h,細胞上清液中LDH活力在低水平下保持穩(wěn)定,細胞可維持良好的生長狀態(tài)達7天以上。2 LPS聯(lián)合恩諾沙星誘導(dǎo)雞肝細胞損傷體外模型的建立2.1 LPS、恩諾沙星致肝細胞損傷...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略符號
前言
第一章 文獻綜述
    1 原代肝細胞分離與體外培養(yǎng)
        1.1 肝細胞分離方法
        1.2 肝細胞培養(yǎng)方法
        1.3 肝細胞體外培養(yǎng)影響因素的分析
    2 內(nèi)毒素致肝損傷機制
        2.1 內(nèi)毒素對肝臟的直接損傷作用
        2.2 內(nèi)毒素對肝臟的間接損傷作用
    3 藥物性肝損傷機制
        3.1 藥物的固有毒性
        3.2 特異體質(zhì)反應(yīng)
    4 復(fù)方甘草酸單胺藥理作用研究進展
        4.1 抗炎作用
        4.2 抗病毒作用
        4.3 抗氧化作用
        4.4 調(diào)節(jié)細胞色素P450酶系
        4.5 免疫調(diào)節(jié)作用
    參考文獻
第二章 雞肝細胞分離及原代培養(yǎng)方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 雞肝細胞分離結(jié)果
        2.2 細胞生長情況
        2.3 細胞培養(yǎng)上清液中的LDH活力測定結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻
第三章 LPS聯(lián)合恩諾沙星誘導(dǎo)雞肝細胞損傷體外模型的建立
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 LPS誘導(dǎo)肝細胞損傷最佳劑量篩選
        2.2 恩諾沙星誘導(dǎo)肝細胞損傷最佳劑量篩選
        2.3 確定LPS聯(lián)合恩諾沙星誘導(dǎo)肝細胞損傷模型建立方法
    3 討論
    4 小節(jié)
    參考文獻
第四章 復(fù)方甘草酸單胺對LPS聯(lián)合恩諾沙星誘導(dǎo)雞肝細胞損傷的保護和抗氧化作用
    1 材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 CAG對LPS聯(lián)合恩諾沙星損傷雞原代肝細胞的保護作用
        2.2 CAG對LPS聯(lián)合恩諾沙星損傷雞原代肝細胞的抗氧化作用
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻
第五章 復(fù)方甘草酸單胺對LPS聯(lián)合恩諾沙星誘導(dǎo)雞肝細胞凋亡損傷的影響
    1 材料和方法
        1.1 試驗材料
        1.2 試驗方法
    2 結(jié)果
        2.1 Annexin V-FITC/PI染法檢測細胞凋亡率
        2.2 實時熒光定量PCR結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻
全文結(jié)論
致謝



本文編號：3919383