為確定感染性克隆質(zhì)粒免疫小鼠拯救獲得的病毒量與誘導(dǎo)抗體之間的關(guān)系,以選擇最佳免疫劑量,本研究建立了一種快速、靈敏的TaqMan熒光定量PCR檢測方法。根據(jù)pcDNA3.1(+)-PCV1-2m-V5質(zhì)粒的ORF2和V5標(biāo)簽序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針,并將該質(zhì)粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品,優(yōu)化熒光定量PCR條件后,按10倍倍比稀釋,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行靈敏性、特異性和穩(wěn)定性驗(yàn)證;而后,應(yīng)用該方法對免疫不同質(zhì)粒濃度的6組小鼠,分別在免疫后1～9周進(jìn)行病毒血癥檢測;同時(shí),應(yīng)用ELISA方法分別對PCV2抗體滴度進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,試驗(yàn)建立的熒光定量PCR方法具有良好的靈敏性、特異性和穩(wěn)定性,檢測范圍可達(dá)1.29×10¹～1.29×10⁹拷貝/μL;病毒血癥可持續(xù)至第5周,抗體可維持至第8周。通過分析抗體滴度變化與病毒載量消長關(guān)系,確定使用200μg作為小鼠的最佳免疫劑量。本試驗(yàn)為感染性克隆質(zhì)粒進(jìn)一步在本體動(dòng)物(豬)體內(nèi)評估免疫效果奠定基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、試驗(yàn)動(dòng)物、菌株以及病料樣品
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 引物探針設(shè)計(jì)與合成
    1.4 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
    1.5 反應(yīng)條件的優(yōu)化
    1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建和敏感性試驗(yàn)
    1.7 特異性和重復(fù)性試驗(yàn)
    1.8 PCV1-2m病毒載量及特異性抗體滴度檢測
2 結(jié)果
    2.1 反應(yīng)條件優(yōu)化結(jié)果
    2.2 熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及敏感性試驗(yàn)
    2.3 特異性和重復(fù)性檢測結(jié)果
    2.4 PCV1-2m病毒載量及特異性抗體滴度檢測結(jié)果
3 討論



本文編號：3911303