反芻動物瘤胃黏膜由于飼料使用不合理導(dǎo)致瘤胃酸中毒、菌群失調(diào)等癥狀,引起瘤胃免疫屏障損傷,嚴重影響動物生產(chǎn)性能,甚至導(dǎo)致死亡。本文擬通過體外LPS誘導(dǎo)山羊瘤胃上皮細胞損傷模型,研究甘草皂苷干預(yù)該損傷瘤胃上皮細胞模型的炎性因子及NF-κB信號通路表達的影響。分析甘草皂苷對體外LPS誘發(fā)的山羊瘤胃炎癥反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)作用機理,為解決反芻動物養(yǎng)殖過程中瘤胃損傷的預(yù)防及研究甘草提取物類飼料添加劑提供新的思路和參考數(shù)據(jù)。試驗一山羊瘤胃上皮原代細胞的分離培養(yǎng)與細胞免疫熒光鑒定本試驗體外分離山羊瘤胃上皮細胞,進行體外培養(yǎng)。試驗選用健康狀況良好的,體重約10 kg的1.5月齡健康的波爾山羊的瘤胃上皮組織,無菌操作成功分離瘤胃上皮細胞。用胰蛋白酶消化細胞,消化下來的細胞在37℃,5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。鏡下觀察,當上皮細胞貼壁程度達到80%⁹0%時,進行細胞傳代及純化,細胞傳代培養(yǎng)至第6代開始進行后續(xù)試驗。以細胞計數(shù)法將把細胞密度調(diào)整為:1×10³、1×10⁴、1×10⁵、1×10⁶

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1山羊瘤胃組織的清洗和處理

細胞的凍存管放入﹣80℃冰箱里，過夜；天將把細胞移至液氮中，可長期保存。斯倒置顯微鏡觀察山羊瘤胃上皮細胞形態(tài)學(xué)變化，MTT法16統(tǒng)計，組間差異數(shù)據(jù)采用SPSSStatistics軟件分析。析組織的沖洗和處理瘤胃組織被取出后，先用清水洗凈瘤胃，清除瘤胃內(nèi)飼草顆清洗3....

圖2-2瘤胃組織的分離

士學(xué)位論文第2章山羊瘤胃上皮原代細胞的分離培養(yǎng)與細胞Fig.2-1Cleaningandhandlingofrumentissueingoats組織的分離看到，瘤胃粘膜被眼科剪刀和眼科鑷子剝離或剪成約1㎜3的小碎片

圖2-3瘤胃組織胰蛋白酶消化步驟

圖2-2瘤胃組織的分離Fig.2-2Isolationofrumentissue組織胰蛋白酶消化步驟體積的兩倍添加0.5%的胰蛋白酶/EDTA細胞消化液，用振蕩器震蕩消化液。消化之后用0.5mm尼龍網(wǎng)過濾5～7次，收集第一次之外的濾養(yǎng)基終止消化（圖2-....

圖2-4山羊瘤胃上皮細胞計數(shù)、傳代和純化培養(yǎng)

圖2-4山羊瘤胃上皮細胞計數(shù)、傳代和純化培養(yǎng)Fig.2-4Enumeration,passageandpurificationofrumenepithelialcellsingoats羊原代瘤胃上皮細胞形態(tài)瘤胃上皮細胞的形態(tài)如圖2-5所示，剛接種細胞后....

本文編號：3911459