豬流行性腹瀉病毒是造成仔豬高發(fā)病率和高死亡率的一種腸道致病性冠狀病毒,具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。引起的以水樣腹瀉、嘔吐和脫水為特征,各種年齡和不同品種的豬群都有易感性的一種急性高度接觸性的豬腸道傳染病。PABPC4(cytoplasmic poly(A)binding protein 4)是一種mRNA結(jié)合蛋白,在紅細(xì)胞分化、端粒酶活性調(diào)節(jié)和細(xì)胞生長(zhǎng)中起重要作用。N蛋白是RNA結(jié)合蛋白,參與轉(zhuǎn)錄、翻譯和病毒組裝。實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)PABPC4與PEDV N蛋白互作。為進(jìn)一步探究PABPC4對(duì)冠狀病毒復(fù)制的影響,我們進(jìn)行了以下研究:1.SP1調(diào)控PABPC4的表達(dá)。通過(guò)PABPC4啟動(dòng)子擴(kuò)增、雙熒光素酶試驗(yàn)和熒光定量PCR等試驗(yàn),結(jié)果表明:SP1為PABPC4的轉(zhuǎn)錄因子。2.PABPC4抑制PEDV復(fù)制并通過(guò)PABPC4-MARCH8-NDP52自噬途徑降解PEDV N蛋白。第一,在Vero和LLC-PK1細(xì)胞上,過(guò)表達(dá)和干擾PABPC4并感染PEDV。試驗(yàn)結(jié)果表明:PABPC4在Vero細(xì)胞和LLC-PK1細(xì)胞上能夠抑制PEDV復(fù)制。第二,通過(guò)Co-IP、激光共聚焦和GST Pull...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1PEDV感染LLC-PK1、Vero細(xì)胞PABPC4變化量A:PEDV感染LLC-PK1細(xì)胞;B:PEDV感染Vero細(xì)胞

別收取病毒上清液，抽提RNA、反轉(zhuǎn)錄并通過(guò)qPCR的方法檢測(cè)細(xì)胞病毒上清液中PABPC4mRNA水平表達(dá)量，試驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，PEDV感染后的細(xì)胞中PABPC4的含量均表現(xiàn)出下調(diào)，其中，32hPABPC4的含量下調(diào)較顯著（圖2.1A所示）；同樣地，感染Vero細(xì)胞18h....

圖2.2PABPC4啟動(dòng)子核心區(qū)域的分析

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文

圖2.3PABPC4轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)及分析

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文16為了進(jìn)一步證明SP1調(diào)控PABPC4，我們通過(guò)雙熒光素酶試驗(yàn)探究SP1對(duì)PABPC4啟動(dòng)子活性的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：SP1誘導(dǎo)了含有153到1核苷酸的啟動(dòng)子的更高的熒光素酶表達(dá)（圖2.5E所示，p<0.05）。通過(guò)上述一系列試驗(yàn)，我們可以得出：SP1....

圖2.4豬源SP1基因擴(kuò)增M:DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(DL5000)

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文17圖2.4豬源SP1基因擴(kuò)增M:DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(DL5000)Fig.2.4AmplificationoftheSP1genesofPorcineM:DNAMarker(DL5000)圖2.5不同轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控PABPC4表達(dá)A-D:qPCR檢測(cè)內(nèi)源....

本文編號(hào)：3893904