發(fā)布時(shí)間：2023-09-29 01:12

　　破骨細(xì)胞(osteoclast, OC)具有獨(dú)特的骨吸收活性,其骨吸收與成骨細(xì)胞骨形成之間的動(dòng)態(tài)平衡在機(jī)體骨重建過程中扮演著重要的角色。破骨細(xì)胞數(shù)量或功能活性的過度增加會(huì)造成多種骨類疾病,如骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性骨髓瘤、牙周炎等。因此,對(duì)破骨細(xì)胞分化和骨吸收的研究具有重要的臨床意義。在機(jī)體生理或者病理?xiàng)l件下,成骨細(xì)胞或者基質(zhì)細(xì)胞膜上的細(xì)胞核因子-κB受體活化因子配體(recetor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)與破骨細(xì)胞前體細(xì)胞細(xì)胞膜上的細(xì)胞核因子-κB受體因子(recetor activator of nuclear factor-κB, RANK)結(jié)合,促進(jìn)破骨細(xì)胞分化和成熟。成骨細(xì)胞分泌的骨保護(hù)素(osteoprotegerin, OPG)是RANKL的誘餌受體,能與RANK競(jìng)爭(zhēng)RANKL,從而抑制破骨細(xì)胞的分化、成熟以及骨吸收活性。細(xì)胞骨架是真核細(xì)胞胞質(zhì)中錯(cuò)綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),在細(xì)胞形態(tài)和遷移等方面起著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞骨架參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、信息傳遞、能量轉(zhuǎn)換、細(xì)胞分化與分裂等活動(dòng)。研究表明,破骨細(xì)胞的骨吸...

【文章頁數(shù)】：116 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 破骨細(xì)胞分化與骨吸收活性
        1. 破骨細(xì)胞
            1.1 破骨細(xì)胞的來源
            1.2 破骨細(xì)胞凋亡
        2. 破骨細(xì)胞分化與免疫
        3. 破骨細(xì)胞分化和骨吸收
            3.1 骨誘裂過程
            3.2 骨吸收過程
        4. 破骨細(xì)胞分化和骨吸收的調(diào)節(jié)機(jī)制
        5. 破骨細(xì)胞分化和功能的重要調(diào)節(jié)因子
    第二章 Rho GTPases與破骨細(xì)胞的分化和功能
        1. 細(xì)胞骨架
            1.1 細(xì)胞骨架簡(jiǎn)介
            1.2 肌動(dòng)蛋白絲的組裝
            1.3 肌動(dòng)蛋白絲的極性
            1.4 肌動(dòng)蛋白絲的形成機(jī)制
        2. Rho GTPases信號(hào)通路
            2.1 Rho GTPases家族
            2.2 Rho GTPases是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子開關(guān)
            2.3 Rho GTPase家族上游激酶
            2.4 Rho GTPases激酶調(diào)節(jié)機(jī)制
            2.5 Rho GTPase家族下游效應(yīng)物
        3. Rho GTPases對(duì)肌動(dòng)蛋白聚合的調(diào)節(jié)
        4. Rho GTPases間的串話
        5. Rho GTPases與細(xì)胞融合
        6. Rho GTPases與細(xì)胞粘附
            6.1 偽足小體與封閉帶
            6.2 微管對(duì)偽足小體和封閉帶的影響
            6.3 Rho GTPases與細(xì)胞粘附
        7. 破骨細(xì)胞極化
        8. 破骨細(xì)胞的延伸和遷移
        9. Rho GTPase與骨骼疾病的治療
        參考文獻(xiàn)
下篇 試驗(yàn)部分
    第一章 誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞方法的建立
        1. 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 RAW264.7細(xì)胞復(fù)蘇
            1.5 破骨細(xì)胞的誘導(dǎo)與鑒定
            1.6 掃描電鏡觀察骨吸收陷窩
        2. 結(jié)果
            2.1 不同細(xì)胞密度對(duì)OC分化的影響
            2.2 TRAP染色鑒定不同細(xì)胞密度對(duì)生成OC數(shù)量的影響
            2.3 破骨細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計(jì)
            2.4 破骨細(xì)胞骨吸收活性檢測(cè)
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二章 破骨細(xì)胞分化過程中細(xì)胞骨架的變化
        1. 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 破骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)
            1.5 RTCA檢測(cè)細(xì)胞分化
            1.6 TRAP染色鑒定破骨細(xì)胞
            1.7 細(xì)胞骨架的免疫熒光染色
            1.8 QRT-PCR檢測(cè)OC標(biāo)志酶及Rho GTPaes家族基因表達(dá)
        2. 結(jié)果
            2.1 破骨細(xì)胞分化過程中細(xì)胞指數(shù)變化
            2.2 破骨細(xì)胞分化過程中形態(tài)和骨架的變化
            2.3 破骨細(xì)胞融合的選擇性
            2.4 破骨細(xì)胞分化過程中標(biāo)志酶的基因表達(dá)變化
            2.5 破骨細(xì)胞分化過程中Rho GTPases家族基因表達(dá)變化
        3. 討論
            3.1 破骨細(xì)胞分化過程和特殊酶的表達(dá)
            3.2 絲狀偽足決定OC前體細(xì)胞融合的選擇性
            3.3 Rho GTPases對(duì)絲狀偽足形成的調(diào)節(jié)
            3.4 偽足小體在細(xì)胞融合和封閉帶形成中的作用
        4. 結(jié)論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 破骨細(xì)胞分化過程中其前體細(xì)胞凋亡過程與機(jī)制的研究
        1. 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 OC前體細(xì)胞凋亡的觀察
            1.5 QRT-PCR檢測(cè)OC分化中凋亡調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)
            1.6 M-CSF和RANKL對(duì)RAW264.7和BRL-3A細(xì)胞凋亡的影響
            1.7 免疫熒光雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            1.8 DNALadder檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            1.9 QRT-PCTR檢測(cè)OPG對(duì)凋亡調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)的影響
        2. 結(jié)果
            2.1 OC前體細(xì)胞凋亡與相關(guān)Rho GTPases基因的表達(dá)
            2.2 不同細(xì)胞因子對(duì)OC前體細(xì)胞凋亡的影響
            2.3 OC前體細(xì)胞分化與凋亡
            2.4 RhoV介導(dǎo)了OC前體細(xì)胞凋亡
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 OPG抑制破骨細(xì)胞分化過程中絲狀偽足變化的調(diào)控機(jī)理
        1. 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 TRAP染色鑒定OPG對(duì)OC生成的影響
            1.5 免疫熒光染色檢測(cè)OPG對(duì)絲狀偽足的影響
            1.6 qRT-PCR檢測(cè)與絲狀偽足相關(guān)基因的表達(dá)
        2. 結(jié)果
            2.1 破骨細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的篩選
            2.2 不同濃度OPG的對(duì)破骨細(xì)胞形成的影響
            2.3 不同濃度OPG對(duì)OC前體細(xì)胞絲狀偽足的影響
            2.4 OPG對(duì)與絲狀偽足相關(guān)Rho GTPases信號(hào)通路基因表達(dá)的影響
        3. 討論
            3.1 OPG抑制破骨細(xì)胞分化
            3.2 OPG通過調(diào)節(jié)絲狀偽足的長(zhǎng)度影響細(xì)胞分化
            3.3 OPG抑制與絲狀偽足相關(guān)基因的表達(dá)
        參考文獻(xiàn)
    第五章 OPG抑制破骨細(xì)胞骨吸收的機(jī)理研究
        1. 材料和方法
            1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 破骨細(xì)胞培養(yǎng)純化及分組
            1.5 霍夫曼顯微鏡觀察封閉帶形成過程及OPG對(duì)其影響
            1.6 免疫熒光染色檢測(cè)封閉帶形成過程及OPG對(duì)其影響
            1.7 qRT-PCR檢測(cè)Rho GTPases信號(hào)通路基因的表達(dá)
                1.7.1 引物設(shè)計(jì)與合成
                1.7.2 qRT-PCR反應(yīng)
            1.8 免疫印跡法檢測(cè)OPG對(duì)ROCK1蛋白的影響
                1.8.1 蛋白樣品制備
                1.8.2 免疫印跡
            1.9 掃描電鏡觀察OPG對(duì)骨吸收陷窩的影響
        2. 結(jié)果
            2.1 封閉帶的形成過程
            2.2 OPG引起破骨細(xì)胞封閉帶損傷或消失
            2.3 破骨細(xì)胞骨吸收過程中OPG對(duì)RhoGTPases信號(hào)通路的影響
            2.4 OPG對(duì)骨吸收陷窩的影響
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3848989