為分析布氏桿菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作為診斷抗原的可能性,應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增S2JY3基因,用限制性內(nèi)切酶對(duì)目的片段與pET30a(+)原核表達(dá)載體進(jìn)行雙酶切,構(gòu)建重組表達(dá)載體,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),蛋白純化,并進(jìn)行Western blot檢測(cè);利用生物信息學(xué)軟件對(duì)該基因理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果表明, S2JY3基因全長(zhǎng)1 257 bp,編碼418個(gè)氨基酸,蛋白質(zhì)理論大小值為43 kDa,理論等電點(diǎn)為9.73,蛋白質(zhì)不穩(wěn)定系數(shù)為36.31,是穩(wěn)定蛋白,總平均親水性為-0.577,為親水性蛋白;跨膜結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽分析表明S2JY3蛋白無(wú)跨膜區(qū),無(wú)信號(hào)肽區(qū)域。本研究成功構(gòu)建了重組表達(dá)蛋白rS2JY3,Western blot結(jié)果表明rS2JY3與布氏桿菌S2疫苗免疫羊血清發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng),不與自然感染羊血清反應(yīng),具有良好的抗原性和特異性。該研究為羊布氏桿菌S2疫苗免疫和自然感染快速檢測(cè)和鑒定等提供理論依據(jù)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與載體
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的擴(kuò)增
        1.2.2 pET30a-S2JY3的構(gòu)建
        1.2.3 重組表達(dá)菌誘導(dǎo)表達(dá)及Western blot檢測(cè)
        1.2.4 S2JY3基因生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因的PCR擴(kuò)增
    2.2 pET30a(+)-S2JY3重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 重組表達(dá)菌Western blot檢測(cè)
    2.4 S2JY3基因編碼產(chǎn)物的生物信息學(xué)分析
        2.4.1 S2JY3蛋白理化性質(zhì)分析
        2.4.2 S2JY3蛋白親疏水性分析
        2.4.3 S2JY3蛋白跨膜區(qū)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        2.4.4 S2JY3蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.4.5 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.4.6 蛋白抗原表位預(yù)測(cè)
3 討論



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