為分析布氏桿菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作為診斷抗原的可能性,應用PCR技術擴增S2JY3基因,用限制性內(nèi)切酶對目的片段與pET30a(+)原核表達載體進行雙酶切,構(gòu)建重組表達載體,用IPTG誘導表達,蛋白純化,并進行Western blot檢測;利用生物信息學軟件對該基因理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點進行分析。結(jié)果表明, S2JY3基因全長1 257 bp,編碼418個氨基酸,蛋白質(zhì)理論大小值為43 kDa,理論等電點為9.73,蛋白質(zhì)不穩(wěn)定系數(shù)為36.31,是穩(wěn)定蛋白,總平均親水性為-0.577,為親水性蛋白;跨膜結(jié)構(gòu)和信號肽分析表明S2JY3蛋白無跨膜區(qū),無信號肽區(qū)域。本研究成功構(gòu)建了重組表達蛋白rS2JY3,Western blot結(jié)果表明rS2JY3與布氏桿菌S2疫苗免疫羊血清發(fā)生特異性結(jié)合反應,不與自然感染羊血清反應,具有良好的抗原性和特異性。該研究為羊布氏桿菌S2疫苗免疫和自然感染快速檢測和鑒定等提供理論依據(jù)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與載體
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的擴增
        1.2.2 pET30a-S2JY3的構(gòu)建
        1.2.3 重組表達菌誘導表達及Western blot檢測
        1.2.4 S2JY3基因生物信息學分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因的PCR擴增
    2.2 pET30a(+)-S2JY3重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 重組表達菌Western blot檢測
    2.4 S2JY3基因編碼產(chǎn)物的生物信息學分析
        2.4.1 S2JY3蛋白理化性質(zhì)分析
        2.4.2 S2JY3蛋白親疏水性分析
        2.4.3 S2JY3蛋白跨膜區(qū)和信號肽預測
        2.4.4 S2JY3蛋白二級結(jié)構(gòu)預測
        2.4.5 蛋白三級結(jié)構(gòu)預測
        2.4.6 蛋白抗原表位預測
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