非洲豬瘟(ASF)傳播對我國生豬養(yǎng)殖造成重大危害,開發(fā)用于ASF診斷產(chǎn)品已刻不容緩。本研究為制備非洲豬瘟病毒(ASFV)pK205R蛋白單克隆抗體,構(gòu)建了能表達(dá)ASFV pK205R蛋白的工程菌BL21/pET-pK205R。經(jīng)IPTG誘導(dǎo),可表達(dá)可溶性的pK205R蛋白。經(jīng)SDS-PAGE檢測,獲得的蛋白大小為25 kDa左右。經(jīng)Western blot鑒定,純化后的蛋白可與ASFV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。以純化的ASFV pK205R蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,制備了12株針對ASFV pK205R蛋白的單克隆抗體。經(jīng)間接ELISA方法鑒定,單克隆抗體的效價均不低于1∶80 000。單克隆抗體重鏈亞類分別為IgG1及IgG2b,輕鏈亞類均為κ。通過間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)測定12株單克隆抗體均不與豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬偽狂犬病病毒、豬流行性腹瀉病毒存在交叉反應(yīng),且均能與ASFV反應(yīng)。本研究為建立快速檢測非洲豬瘟病毒感染的診斷方法奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動物
    1.2 主要試劑
    1.3 表達(dá)菌株的構(gòu)建
    1.4 pK205R蛋白表達(dá)、純化及鑒定
    1.5 pK205R蛋白單克隆抗體制備
        1.5.1 動物免疫
        1.5.2 間接ELISA方法的建立
        1.5.3 細(xì)胞融合及篩選
        1.5.4 腹水的制備
    1.6 單克隆抗體的鑒定
        1.6.1 單克隆抗體效價及亞類的測定
        1.6.2 單克隆抗體特異性鑒定
        1.6.3 單克隆抗體與ASFV反應(yīng)性檢測
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    2.2 pK205R蛋白表達(dá)純化與鑒定
    2.3 單克隆抗體效價檢測
    2.4 單克隆抗體亞類鑒定
    2.5 特異性檢測
    2.6 單克隆抗體與ASFV反應(yīng)性檢測
3 討論



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